[发明专利]一种提高低再生力小麦基因型幼胚组织培养再生率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高低再生力小麦基因型幼胚组织培养再生率的方法。

背景技术

小麦组织离体培养高频率植株再生是开展小麦细胞工程育种和转基因育种的重要环节之一。目前为止，培养小麦幼胚、幼穗、花药、成熟胚、小孢子等外植体材料先后获得了再生植株，其中，小麦幼胚被认为是再生率最高的外植体类型。但是，小麦幼胚培养在不同基因型之间存在显著差异，能够高频率获得再生植株的基因型非常有限，尤其是一些大面积推广的优良小麦品种，其幼胚的再生能力往往都很低。大面积推广优良小麦品种的适应性、丰产性和抗病性等已满足生态条件和生产发展的需要，改良它们的个别缺点后即可在生产上较长时间种植，因而是细胞工程育种和转基因育种的首选起始材料。研究表明，改良培养基(如SD2培养基)和培养程序(如生长素间歇处理)等技术策略可以提高具有中等以上培养力小麦品种幼胚的再生率，但对弱再生力小麦品种幼胚培养的效果不显著。因此，研究用于提高弱再生力小麦品种幼胚组织培养再生率的培养方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高低再生力小麦幼胚组织培养再生率的方法。

本发明所提供的提高低再生力小麦幼胚组织培养再生率的方法，通过对高、低再生力小麦品种幼胚间隔接种进行愈伤组织诱导培养和对小麦愈伤组织间隔接种进行分化培养这两个步骤来提高低再生力小麦幼胚组织培养的再生率，所述方法包括如下步骤：

1)将高再生力小麦品种的幼胚和低再生力小麦品种的幼胚按行间隔接种于装有愈伤组织诱导培养基的同一个容器中，在黑暗条件下进行诱导培养，得到高再生力小麦品种愈伤组织和低再生力小麦品种愈伤组织；

2)将步骤1)得到的低再生力小麦品种愈伤组织和高再生力小麦品种愈伤组织按行间隔转移到装有分化培养基的同一个培养容器中，即仍然保持步骤1)的间隔接种方式，在光照条件下进行分化培养，得到低再生力小麦品种再生植株和高再生力小麦品种再生植株。

该方法对低再生力小麦幼胚组织培养的再生率高于对所述低再生力小麦幼胚进行单独组织培养的再生率。对所述低再生力小麦幼胚进行单独组织培养的方法除了接种方式是单独接种(装有愈伤组织诱导培养基的培养容器内只接种所述低再生力小麦幼胚，并且装有分化培养基的培养容器内只接种所述低再生力小麦品种胚性愈伤组织)外，其它培养条件均与本发明的方法相同。

所述高再生力小麦品种具体可为新春9号或科农199，所述低再生力小麦品种具体可为中国春。

本发明的上述方法中，所述步骤1)和2)的同一个培养容器中，接种所述高再生力小麦品种的幼胚或愈伤组织的行数和接种所述低再生力小麦品种的幼胚或愈伤组织的行数最好相同，如同一个培养容器中，所述高再生力小麦品种和所述低再生力小麦品种的行数均为3行，其按行间隔接种方式可为第1、3和5行接种所述低再生力小麦品种，第2、4和6行接种所述高再生力小麦品种(图1)。

本发明的上述方法中，所述步骤1)的同一个培养容器中，接种的所述高再生力小麦品种的幼胚的个数具体可为所述低再生力小麦品种的幼胚的个数的1-1.14倍。在本发明的一个实施例中，所述高再生力小麦品种为新春9号，所述低再生力小麦品种为中国春，接种的新春9号的幼胚个数是中国春幼胚个数的1-1.01倍；在本发明的另一个实施例中，所述高再生力小麦品种为科农199，所述低再生力小麦品种为中国春，接种的科农199的幼胚个数是中国春幼胚个数的1.13-1.14倍；所述步骤2)的同一个培养容器中，接种的所述高再生力小麦品种的愈伤组织的个数是所述低再生力小麦品种的愈伤组织的个数的0.85-1.21倍。在本发明的一个实施例中，所述高再生力小麦品种为新春9号，所述低再生力小麦品种为中国春，接种的新春9号的愈伤组织个数是中国春愈伤组织个数的0.85-1.10倍；在本发明的另一个实施例中，所述高再生力小麦品种为科农199，所述低再生力小麦品种为中国春，接种的科农199的愈伤组织个数是中国春愈伤组织个数的1.12-1.21倍。

本发明的上述方法中，所述步骤1)中的按行间隔接种的行距(相邻两行中心线的垂直距离)可为0.9-1.1cm，幼胚距(样距)(每行中相邻两个幼胚中心之间的距离)可为0.5-0.7cm；所述步骤2)中的按行间隔接种的行距(相邻两行中心线的垂直距离)可为0.9-1.1cm，愈伤组织距(样距)(每行中相邻两个愈伤组织中心之间的距离)可为0.5-0.7cm。