[发明专利]口腔癌易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种口腔癌易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估口腔癌发病的风险级别，并作为预防和治疗口腔癌的方向指导。

背景技术

口腔癌是发生在口腔的恶性肿瘤的总称，大部分属于鳞状上皮细胞癌。在临床实践中口腔癌包括唇癌、牙龈癌、舌癌、软硬腭癌、颌骨癌、口底癌、口咽癌、涎腺癌和上颌窦癌以及发生于颜面部皮肤粘膜的癌症等。口腔癌是头颈部较常见的恶性肿瘤之一。

口腔癌在全世界是居第六位的常见肿瘤，并且男性的发生率较女性高1至5倍。在发展中国家，口腔癌是一大问题。口腔癌的发生率与年龄的增加有关。40岁后发生率急剧上升。随着世界老龄人口的增加，将有更多的老年人处于口腔癌的高度危险之中。其危险随年龄增长急剧上升，由30岁男性的7/10万升至60岁时80/10万。

口腔癌发生初期，往往无痛苦，不易引起患者的重视，或者患者虽然发现一些异常但希望其能自行消失。口腔癌最好的治疗方法莫过于手术切除。但一般当口腔癌被确诊时，往往错过了最佳手术时机。此时即使可以手术，也会因为手术面积大而对口腔造成损害，不能恢复正常的功能与形态。因此，早期发现及预防就成为了治疗口腔癌的重要前提。通过大量的研究证明，CYP1A1基因上Ile462Val位点多态性及MspI位点多态性，CYP2D6基因上C188T位点多态性的3个单核苷酸多态性与口腔癌的发生密切相关。

CYP1A1基因编码细胞色素P4501A1。该蛋白是重要的活化多环芳烃类致癌物的主要酶类。被激活的CYP1A1能够将多种环境中的有机物质如多环芳烃转化为细胞毒素或其他致癌物质，从而更加造成癌症发生的危险。分子生物学研究表明，CYP1A1第462号氨基酸由Ile变为Val，以及CYP1A1 MSPI位点T→C，会增加CYP1A1酶活性，可产生高诱导活性的CYP1A1酶，使多环芳烃类化合物活化速率加快，导致多种癌症的发生风险增高。国内外研究表明CYP1A1基因多态性与口腔癌发生密切相关，大样本的中国人群的关联分析显示，该位点的多态现象是中国人群中重要的口腔癌遗传易感因素之一。因此该位点可以作为肺癌易感性的遗传检测因子。

CYP2D6酶又称为异喹胍羟化酶，主要是因为异喹胍代谢仅依赖于CYP2D6。CYP2D6表型和基因型有显著的种族差异，亚洲人常见的单核苷酸多态性之一是CYP2D6第一号外显子C188T突变，造成Pro34Ser氨基酸替代，导致编码的酶活性改变，影响对前致癌物的代谢，与个体的口腔癌易感性有密切关系。

综上所述，鉴于CYP1A1基因上Ile462Val位点多态性及MspI位点多态性，CYP2D6基因上C188T位点多态性在口腔癌变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者在口腔癌发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患口腔癌的高危人群，从而有针对性的预防和治疗口腔癌，这对于降低口腔癌的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于CYP1A1基因上Ile462Val位点多态性及MspI位点多态性，CYP2D6基因上C188T位点多态性的3个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估口腔癌发病的危险因子的基础上，本发明提供一种口腔癌易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测CYP1A1基因上Ile462Val位点多态性及MspI位点多态性，CYP2D6基因上C188T位点多态性的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对(每条引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。