[发明专利]一种耐盐薄荷的组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种耐盐薄荷的组培快速繁殖的技术，本发明属于农业生物技术领域。 

背景技术

土壤盐渍化问题是困扰农业生产的一大难题。当前，世界上灌溉地面积约为230M hm²，其中遭盐害影响的土壤约占45M hm²。旱地农业面积约为1500M hm²，其中遭盐害影响的土壤约占32M hm²。耕地土壤盐渍化的退化面积正在以3 hm²/min的速度增长。据FAO估计，世界范围内，每年由于盐害造成土地生产力丧失的面积达0.25~0.50M hm²。参见王小彬，关注水资源利用与气候变化对土壤盐渍化的重叠影响（中国土壤与肥料，2009(2)：80）。就我国而言，在1亿 hm²耕地中有667万 hm²盐碱化土壤，另有0.346亿 hm²盐碱荒地。贾利霞，NaC1胁迫对苜蓿种子萌发的影响（内蒙古草业，2008，20(1)：40-42）。随着我国人口的剧增及工业的高速发展，可耕地面积急剧下降，同时，不合理灌溉又造成了大量良田的次生盐渍化。因此，开发和利用大面积的盐渍化土地，利用耐盐植物资源发展盐渍地生态农业十分必要。 

    本发明所涉及的耐盐薄荷是山东省科学院中日友好生物技术研究中心通过测定NaCl 胁迫后薄荷的叶片含水量、渗透势、电导率和MDA 含量以及CAT 酶活性等生理反映指标筛选出的，耐受NaCL胁迫浓度为0.8%。系椒样薄荷(Mentha piperita L. )的一种，购自北京蔬菜研究中心蔬菜种质资源与特菜引种研究室。耐盐薄荷除具有薄荷的一般功效外，作为耐盐碱的药赏两用植物逐渐被关注。由于椒样薄荷是水薄荷与绿薄荷杂交而成的一个不育性中间类型，仅以分株繁殖为主。（参见陈英，植物体细胞无性系变异与育种南京：江苏科学技术出版社， 1991： 1-10）。耐盐薄荷长期采用无性繁殖，易发生病毒病，引起品种退化和产量、质量的下降，造成耐盐薄荷种质资源匮乏。因此需要研究开发一种适用于耐盐薄荷的组培快繁方法。 

                                                                                                                                                   发明内容

    本发明的目的是提供一种耐盐薄荷的组培快繁技术。

    本发明以耐盐薄荷茎段为外植体，采用不同发育期茎段分开消毒的方法，对其离体培养及植株再生条件进行了研究，为耐盐薄荷的品种改良和快速繁殖奠定了重要的基础。 

    本发明所述的耐盐薄荷的组培快繁方法包括外植体无菌处理、愈伤诱导培养、不定芽增值培养、生根培养、耐盐变异体的筛选、组培苗的驯化与移栽各步骤，其技术要点包括：采用不同生育期的茎段分开灭菌的方法，建立外植体无菌系；愈伤诱导培养基的筛选；不定芽增值培养基的筛选；生根培养基的筛选；耐盐变异体的筛选；组培苗的驯化与移栽方法。 

具体操作步骤和工艺条件如下： 

     1.外植体无菌系的建立

     从苗圃中取生长旺盛的薄荷植株，去叶留茎和芽点，流水冲洗20 min后，滤纸吸干水分，用手术剪对外植体进行修剪，截取3cm长茎段，然后将不同生育期的茎段（茎尖、中部茎段、基部茎段）分开，备用。在超净工作台上用75 %酒精溶液消毒10s～60s、0.1 %升汞溶液消毒8～15 min 后，用无菌水冲洗4～5遍，吸干水后再用手术剪对外植体进行修剪，去除两端发黑部分，然后将其接种在1/2MS培养基中，置于光照培养箱中培养。3天后观察植株的污染情况，统计污染率（表1）。

     经试验确定薄荷茎段采用75 %酒精30～60s +0.1 %升汞溶液消毒8～10min，可将外植体的污染率控制在1%以下，且消毒液对不同生育期的茎段无损害。 

    2.愈伤诱导培养基的筛选采用正交试验L4(2³)筛选。选取3cm长的健壮无菌苗，置于培养基中，进行愈伤的诱导。培养30 d 后，调查愈伤诱导率（表2、表3）。 

愈伤诱导率＝茎段愈伤形成个数/接种的茎段个数×100%。