[发明专利]一种基因拷贝数的定量检测方法

权利要求书

1.一种基因拷贝数的定量检测方法，包括如下步骤：

1)分别选取目的基因、参比基因的扩增序列；

2)分别设计目的基因和参比基因扩增序列的引物、荧光探针，及目的基因扩增序列的封闭探针，封闭探针包括上游封闭探针和下游封闭探针；

3)样本检测：以待检DNA样本作为模板，对目的基因和参比基因进行多重TaqMan荧光定量PCR反应，并以目的基因拷贝数已知的DNA样本为对照样本，分别记录Ct值；

4)结果分析：计算待检样本目的基因的拷贝数相对定量值，判断分析检测样本目的基因的拷贝数。

2.根据权利要求1所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：封闭探针的3’末端经过修饰失去了延伸能力。

3.根据权利要求1所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：目的基因的引物、封闭探针分别与目的基因的结合位点相同。

4.根据权利要求1所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：目的基因、参比基因的引物的5’末端分别引入了4～7 bp与基因组模板非互补的碱基序列。

5.根据权利要求1所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：封闭探针比目的基因的引物的Tm值高3～5℃。

6.根据权利要求1所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：扩增序列为一段GC含量40～60%、长度70～150bp的DNA序列，且与基因非扩增区无同源序列。

7.根据权利要求2所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：封闭探针的3’末端经Spacer C3修饰。

8.根据权利要求1所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：进行多重TaqMan荧光定量PCR反应时，先预扩增3～5个循环，再进行实时荧光定量检测。

9.根据权利要求8所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：预扩增的变性温度为94～96℃，退火温度为52～55℃；实时荧光定量检测的变性温度为90～92℃，退火温度为60～62℃。

10.根据权利要求1所述的基因拷贝数的定量检测方法，其特征在于：参比基因为待检DNA样本所属物种基因组中的一种看家基因。