[发明专利]生产红霉素的工程菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生产红霉素的工程菌及其应用。

背景技术

红霉素是一类大环内酯类抗生素，广泛应用于抑制革兰氏阳性菌的感染。自1952年发现以来，红霉素及其衍生物在临床上得到了广泛的应用。目前红霉素类抗生素年销售额超过35亿美元，位居抗生素销售额第三位，被认为是下一代治疗耐药性细菌的抗生素，随第二代红霉素(如阿奇霉素、罗红霉素、克拉霉素等)、第三代红霉素(如泰利霉素)在日本和欧洲上市，国内外市场对红霉素的需求大大增加。

目前我国是世界最大的红霉素原料生产国，但是主要还是依靠发酵生产，普遍存在红霉素效价低的问题。国内提高红霉素发酵效价主要是通过传统的育种工作，如使用有效的化学或放射线随机诱导菌种突变以提高菌株的抗生素产量，或者使用天然杂交或原牛质体融合技术从突变筛选系的分支处组合预期基因以得到高产量的菌株。传统的育种方法存在一些局限性，如目标性差，筛选工作繁重，周期长等。

发明内容

本发明的目的是提供生产红霉素的工程菌及其应用。

本发明保护将重组质粒导入红色糖多孢菌得到的重组菌；所述重组质粒为将ermE*启动子、eryBII蛋白的编码基因和eryF蛋白的编码基因插入出发载体的多克隆位点得到的重组质粒；所述重组质粒中由ermE*启动子启动所述eryBII蛋白的编码基因和所述eryF蛋白的编码基因的表达；所述红色糖多孢菌的ATCC编号为11635；所述ermE*启动子如序列表的序列1所示；所述eryBII蛋白如序列表的序列2所示；所述eryF蛋白如序列表的序列4所示。

所述eryBII蛋白的编码基因可如序列表的序列3所示；所述eryF蛋白的编码基因可如序列表的序列5所示。

所述重组质粒中，自上游至下游可依次包括所述ermE*启动子、所述eryBII蛋白的编码基因和所述eryF蛋白的编码基因。

所述出发载体具体可为载体pSET152。

所述重组质粒具体可为将所述ermE*启动子插入所述载体pSET152的XbaI酶切位点、所述eryBII蛋白的编码基因插入所述载体pSET152的BamHI和EcoRI酶切位点之间、所述eryF蛋白的编码基因插入所述载体pSET152的EcoRI酶切位点得到的重组质粒。

所述重组菌具体可为红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea)MFSE0015。红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea)MFSE0015简称红色糖多孢菌MFSE0015，已于2012年3月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC；地址：中国武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO：M 2012052。

以上任一所述重组菌均可用于生产红霉素。

本发明还保护一种生产红霉素的方法，包括如下步骤：将以上任一所述的重组菌进行发酵，得到红霉素。

所述发酵的条件可为33.5℃、振荡培养6天。所述发酵采用的发酵培养基具体如下：由溶质和水组成；每50ml发酵培养基含如下溶质：35g玉米淀粉、30g黄豆饼粉、30g糊精、0.6ml正丙醇、2g硫酸铵、12ml豆油和6g碳酸钙。所述发酵培养基的pH具体可为7。

所述重组菌具体可以以种子液的方式接种至所述发酵培养基。所述种子液是将所述重组菌接种至种子培养基进行培养得到的。所述种子液与所述发酵培养基的体积配比具体可为1∶10。所述培养的条件可为33.5℃、振荡培养2天。所述种子培养基由溶质和水组成；每50ml种子培养基含如下溶质：50g玉米淀粉、15g黄豆饼粉、12ml玉米浆、1.5g氯化钠、1.5g硫酸铵、7ml豆油和6g碳酸钙。所述种子培养基的pH具体可为7。

以上任一所述重组菌均可用于生产微生物抑制剂。所述微生物可为短小芽孢杆菌，具体可为CMCC编号为63202的短小芽孢杆菌。

本发明还保护一种生产微生物抑制剂的方法，包括如下步骤：将以上任一所述的重组菌进行发酵，得到微生物抑制剂。

所述发酵的条件可为33.5℃、振荡培养6天。所述发酵采用的发酵培养基具体如下：由溶质和水组成；每50ml发酵培养基含如下溶质：35g玉米淀粉、30g黄豆饼粉、30g糊精、0.6ml正丙醇、2g硫酸铵、12ml豆油和6g碳酸钙。所述发酵培养基的pH具体可为7。