[发明专利]PCR检测解脲脲原体生物群的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种PCR检测试剂盒，尤其涉及一种用于检测解脲脲原体生物群的试剂盒、以及检测方法。

背景技术

解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，UU）又称为溶脲脲原体，能利用自身的尿素酶，分解尿素后以提供代谢的能源，是人类泌尿生殖道常见的寄生菌之一，与人类泌尿生殖道感染有密切关系，现已被列为性传播疾病的病原体。解脲脲原体的致病物质主要有脲酶，IgA蛋白酶及磷脂酶等。

研究解脲脲原体与疾病的关系最早是从非淋病性尿道炎开始的，近年来，大量研究证实：解脲脲原体与非淋病性尿道炎、前列腺炎、妇科疾病、不育症等多种疾病有关，由此，解脲脲原体对人体健康的危害不容忽视，有必要予以关注。

以往解脲脲原体感染主要由经验丰富的医生通过临床经验进行诊断，误诊率较高；病原体培养诊断则常常受到病原体培养、标本运送、培养时间等因素的限制。为了找到更好的解脲脲原体检测方法，人们做出了许多努力，如专利CN101407836B和CN102277429A中分别公开的基因芯片探针、CN101555457A中公开的支原体培养基及检测方法、CN101566621A公开的检测试纸、CN101851661A公开的检测方法等，均可以用于检测解脲脲原体。

随着PCR技术的发展，PCR方法检测已在临床上加以应用。荧光定量PCR技术以其灵敏度高、速度快、特异性强等优点，在基因表达分析、病原体定性、和定量检测方面得到了广泛的应用，并已成为当前病毒核酸定量检测的主要方法，并已有大量的检测试剂盒和检测方法被公开或商业化，如CN1086739C公开的PCR检测方法和引物、CN100352944C公开的荧光定量PCR试剂盒、CN101497926A公开的多重荧光定量PCR检测试剂盒、CN102191321A公开的用于PCR检测的试剂盒。

目前，解脲脲原体可被分为两大群生物1群（Ureaplasma Parvum，Biovar 1， parvo）和生物2群（Ureaplasma urealyticum，Biovar 2，T 960）共14个血清型，解脲脲原体生物分群对于进一步研究解脲脲原体的生物学特性及与临床致病性的关系都具有重要意义。

目前，研究中常以生长抑制试验（growth inhibition test，GIT）或代谢抑制试验（metabolism inhibition test, MIT）检测解脲脲原体的生物群和生物型，即通过将多克隆抗解脲脲原体血清添加到解脲脲原体的固体或液体培养基中，通过观察抑制解脲脲原体生长情况判断实验结果。这一方法不仅成本高耗时（通常需要数天至一周），而且免疫血清易发生交叉反应（5型和2型，14型和3型，8型和13型）导致结果特异性差。而常规PCR技术虽可完成解脲脲原体生物群的快速检测，但其易受污染，出现假阳性，且无法完成定量检测。

鉴于目前临床上尚缺乏较好的解脲脲原体快速分群的方法，由此急需开发解脲脲原体生物群检测的新方法。

发明内容

针对目前临床上缺乏较好的解脲脲原体快速分群的方法，本发明提供了一种用于实时定量PCR检测解脲脲原体生物群的引物、试剂盒、以及检测方法。

本发明的第一个方面是提供一种用于实时定量PCR检测解脲脲原体生物1群的引物，所述引物如下：

正向引物：5′-ACATCAGYTGAAAACAAAACAG-3′          SEQ ID No.1

反向引物：5′- GTT TTGGTTCACGAGGTAAT -3′               SEQ ID No.2

本发明的第二个方面是提供一种用于实时定量PCR检测解脲脲原体生物2群的引物，所述引物如下：

正向引物：5′-CACTTACTTAACAARAAAATCYACGT-3′  SEQ ID No.3

反向引物：5′-GCAGTTTTTAGTAAKCCACCT T-3′          SEQ ID No.4

本发明的第三个方面是提供一种用于实时定量PCR检测解脲脲原体生物1群的荧光探针的核苷酸序列，所述荧光探针序列如下：

5′-AAAAGGTCATTTGRTTGGTGAA AAA-3′               SEQ ID No.5

本发明的第四个方面是提供一种用于实时定量PCR检测解脲脲原体生物2群的荧光探针的核苷酸序列，所述荧光探针序列如下：