[发明专利]一对转录激活子样效应因子核酸酶及其编码基因与应用有效
| 申请号： | 201210096816.X | 申请日： | 2012-04-05 |
| 公开（公告）号： | CN102627691A | 公开（公告）日： | 2012-08-08 |
| 发明（设计）人： | 肖磊;庄庆刚 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C07K14/195 | 分类号： | C07K14/195;C12N15/31;C12N9/22;C12N15/55;C12N15/63;C12N5/10;C12N15/85;C12R1/64 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一对 转录 激活 效应 因子 核酸酶 及其 编码 基因 应用 | ||
1.一对短肽，其特征在于，所述一对短肽分别具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
2.一对多核苷酸，其特征在于，所述一对多核苷酸分别编码如权利要求1所述的一对短肽。
3.如权利要求2所述一对多核苷酸，其特征在于，所述一对多核苷酸分别具有如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的碱基序列。
4.一对蛋白质，其特征在于，所述一对蛋白质由权利要求1所述的一对短肽两端分别加上转录激活子样效应因子氨基酸序列框架的N端和C端组成；其中，所述的转录激活子样效应因子氨基酸序列框架的N端和C端为天然的或经过人工改造的序列。
5.如权利要求4所述一对蛋白质，其特征在于，所述一对蛋白质分别具有如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。
6.一对多核苷酸，其特征在于，所述一对多核苷酸分别编码如权利要求4或5所述的一对蛋白质。
7.如权利要求6所述一对多核苷酸，其特征在于，所述一对多核苷酸分别具有如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的碱基序列。
8.一对融合蛋白，其特征在于，所述一对融合蛋白由权利要求4所述的一对蛋白质分别与DNA切割蛋白融合而成。
9.如权利要求8所述一对融合蛋白，其特征在于，所述的一对蛋白质分别与DNA切割蛋白的二个亚基融合。
10.如权利要求9所述一对融合蛋白，其特征在于，所述的DNA切割蛋白为天然的或经过人工改造的Fok1 DNA内切酶。
11.如权利要求8-10任一权利要求所述一对融合蛋白，其特征在于，所述一对融合蛋白分别具有如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。
12.一对多核苷酸，其特征在于，所述一对多核苷酸分别编码如权利要求8-10任一权利要求所述的一对融合蛋白。
13.一对多核苷酸，其特征在于，所述一对多核苷酸分别编码如权利要求11所述的一对融合蛋白。
14.如权利要求13所述的一对多核苷酸，其特征在于，所述一对多核苷酸分别具有如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的碱基序列。
15.一种包含权利要求2-3、6-7、13或14任一权利要求所述一对多核苷酸中的任意一条多核苷酸的载体。
16.一种用权利要求15所述载体转化的宿主细胞。
17.一种包含权利要求12所述一对多核苷酸中的任意一条多核苷酸的载体。
18.一种用权利要求17所述载体转化的宿主细胞。
19.如权利要求16或18所述宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为山羊或绵羊IPS细胞。
20.一种如权利要求11所述一对融合蛋白或如权利要求14所述一对多核苷酸在对山羊或绵羊朊蛋白基因靶向修饰中的应用。
21.一种山羊或绵羊朊蛋白基因打靶的方法，其特征在于，包括：将权利要求11所述一对融合蛋白或者权利要求13或14所述一对多核苷酸或者含有权利要求13或14所述一对多核苷酸的载体转入山羊或绵羊IPS细胞，于30-37℃扩增培养3-7天，得到朊蛋白基因被靶向修饰的细胞。
22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述山羊或绵羊IPS细胞中还转入有抗puro蛋白或能表达抗puro蛋白的质粒。
23.如权利要求21或22所述的方法，其特征在于，所述扩增培养过程中至少有1天在30℃下进行。
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