[发明专利]呋喃妥因代谢物半抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及呋喃妥因代谢物半抗原及其制备方法和应用。

背景技术

呋喃妥因，属于硝基呋喃类药物，是一种人工合成的抗菌药，常作为广谱类抗生素用于预防和治疗由沙门氏菌和埃希氏菌引起的猪、牛、家禽及蜜蜂的胃肠道疾病。但近年来的研究表明，硝基呋喃类药物及其代谢产物具有很大的毒性，有致畸胎副作用，且能诱发癌症，因而引起了人们的高度重视，多国已禁止了此类药物在治疗和饲料中的使用。

由于硝基呋喃类药物的热和化学不稳定性，常以检测其代谢产物作为残留标示物。目前用来检测呋喃妥因代谢物的最常用方法是高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC-MS、LC-MS/MS)等，由于复杂的仪器设备和繁琐的前处理过程以及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控和大量样本的筛查。而以抗原抗体特异性反应为基础的免疫分析技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已在食品安全检测领域得到广泛应用，这为呋喃妥因代谢物的检测提供了新的途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种呋喃妥因代谢物半抗原及其制备方法。

本发明提供的呋喃妥因代谢物半抗原，分子结构式为：

本发明提供的呋喃妥因代谢物半抗原的制备方法，包括如下步骤：

取呋喃妥因代谢物(AHD)1.15g和20ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)混合，得到A液；取对苯二甲醛2.68～5.36g和50～100ml DMF混合，得到B液；室温下将A液缓慢滴加入B液中，滴加完毕后室温至60℃反应2～4h，除去溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色物质，即为呋喃妥因代谢物半抗原。

本发明的另一个目的是上述呋喃妥因代谢物半抗原在免疫检测中的应用，具体包括由所述呋喃妥因代谢物半抗原与载体蛋白偶联得到的呋喃妥因代谢物抗原，及由所得呋喃妥因代谢物抗原免疫动物制备得到的呋喃妥因代谢物抗体，

其中所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原，

所述抗体为呋喃妥因代谢物单克隆抗体。

本发明还提供由上述呋喃妥因代谢物抗体制备的酶联免疫试剂盒及其在检测动物源性食品中呋喃妥因代谢物残留的应用。

本发明提供的呋喃妥因代谢物半抗原既最大程度地保留了呋喃妥因代谢物的化学结构，又通过化学合成改造引入了可以与蛋白质偶联的-CHO，合成方法简单，纯度、产率较高；用该半抗原作为原料，制备适于动物免疫的抗原体系免疫动物，所得抗体的效价、特异性、亲和力都比较好；所得的抗体用于酶联免疫试剂盒，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适于动物源性食品中呋喃妥因代谢物残留的现场监控和大量样本的筛查。本发明的呋喃妥因代谢物半抗原在呋喃妥因代谢物的检测中发挥重要作用。

附图说明

图1：呋喃妥因代谢物半抗原合成路线图

图2：呋喃妥因代谢物半抗原核磁共振氢谱图

图3：呋喃妥因代谢物酶联免疫试剂盒标准曲线

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。

实施例1  呋喃妥因代谢物半抗原的合成和鉴定

一、呋喃妥因代谢物半抗原的合成(合成路线如图1)

取呋喃妥因代谢物(AHD)1.15g和20ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)混合，得到A液；取对苯二甲醛2.68～5.36g和50～100ml DMF混合，得到B液；室温下将A液缓慢滴加入B液中，滴加完毕后室温至60℃反应2～4h，除去溶剂，柱层析纯化，得到淡黄色物质，即为呋喃妥因代谢物半抗原。

二、呋喃妥因代谢物半抗原的鉴定

取合成的呋喃妥因代谢物半抗原经核磁共振氢谱测定，如图2所示，图谱中8.0ppm左右的峰为引入苯环上4个H的信号峰，8.4ppm左右的峰为醛基上H的信号峰，9.9ppm左右的峰为烯胺双键上C-H的信号峰，说明半抗原合成成功。

实施例2  呋喃妥因代谢物抗原

将呋喃妥因代谢物半抗原与载体蛋白进行偶联得到呋喃妥因代谢物抗原。

一、免疫原的制备——呋喃妥因代谢物半抗原-牛血清白蛋白偶联物合成