[发明专利]一种肿瘤靶向纳米制剂的制备方法

说明书

技术领域

    本发明提供了一种基于高效包载小分子化疗药物的核壳纳米粒的肿瘤靶向制剂的制备方法。属于药物制剂的技术领域。

背景技术

构建靶向于肿瘤组织的药物制剂是靶向治疗肿瘤的关键。肿瘤靶向制剂分为被动靶向和主动靶向两大类，前者主要是借助于纳米尺度的递药载体实现，而后者则是通过肿瘤细胞膜表面的特异性受体介导。

纳米制剂实现被动靶向给药，与肿瘤组织的特殊形态密切相关。较正常组织，肿瘤组织周细胞减少，血管通透性增加，血管内皮间隙变大，通常为100~780nm，纳米制剂尺度恰好与之匹配，可经血管内皮的孔隙渗透至肿瘤组织间质中；而正常血管内皮间隙仅为5~10nm，通常的纳米制剂不能透过其间隙到达正常组织中，从而实现在肿瘤组织中被动靶向分布。又因肿瘤组织内未建立起正常的淋巴回流系统，组织间隙中的药物不能通过组织液回流至淋巴系统，从而药物可以不断在肿瘤组织中蓄积。 目前，纳米（nanoparticles）最能代表纳米尺度水平上的制剂的研究。

叶酸受体(Folate receptor，FR)在卵巢癌、肾癌、子宫内膜癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多种肿瘤细胞膜表面过度表达，通常比正常细胞系高出20～200倍，且其表达水平与肿瘤组织的恶性程度及转移侵袭力呈正相关，因此，FR已成为肿瘤靶向治疗研究的新靶点。肿瘤细胞细胞可通过FR介导的内摄作用（folate receptors -mediated endocytosis）将叶酸（Folic acid，FA）吸收入胞内，正常组织中FR 主要定位于极化上皮尖端表面，且正常细胞多数以还原FA载体途径摄取FA，而FA结合物只能通过FR途径内化，因此，血循环中FA结合物无法与正常组织中FR受体接触，故不易对其造成损伤。FA作为靶向分子已成为介导制剂主动靶向肿瘤的研究热点之一。 

构建药物制剂，首先要选择适合的载体材料。壳聚糖（chitosan，Chi）是由天然高分子甲壳素经脱乙酰基后得到的氨基多糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性，富含的氨基具有很好的反应活性，便于修饰，如FA可通过以γ-羧基与其形成酰胺键而不改变FA的构象，因而不影响FR识别。值得注意的是，Chi在细胞内的酸性环境（pH~5）中易于溶解，可使包载的化疗药物迅速、完全地释放出来，即Chi纳米粒可实现pH触发药物释放（pH-triggered drug release），从而在肿瘤细胞内达到有效的杀伤浓度，有利于逆转肿瘤细胞的MDR。另一方面，Chi为聚阳离子，制成的纳米载体易与荷负电的生物膜表面类脂层发生静电吸附，可延长药物在吸收部位的保留时间，增强药物制剂透过生物膜的能力。

但Chi水溶性较差，制成的纳米粒易被网状内皮系统(RES)摄取而清除。在Chi纳米粒子表面结合亲水聚合物聚乙二醇（Polyethylene glycol，PEG），可提高载药系统的水溶性和体循环中的稳定性，从而逃脱RES的识别与清除，PEG修饰的Chi纳米粒子则因此被称为“隐形”的长循环粒子，在血循环中可稳定保留数小时。一旦被肿瘤细胞摄入后，方释放其包载的药物，维持有效的治疗浓度。

FA和Chi分子可分别连接在PEG的两端，合成FA和PEG双修饰的壳聚糖（FA-PEG-Chi），其中FA分子暴露在最外面，从而能最充分地接触肿瘤细胞，可更好地实现FR介导的主动靶向作用。

目前临床常用的化疗药物多为小分子药物，如紫杉醇、多西他赛、5-氟尿嘧啶、阿霉素、吉西他滨等。常规的离子凝胶法、微乳法、乳化溶剂扩散法、溶剂蒸发法等制备壳聚糖纳米粒子的方法更适合包裹一些亲水性大分子，如疫苗、多肽、蛋白、基因等，而小分子化疗药物主要依靠与壳聚糖之间的物理作用吸附于纳米粒子表面，载药量和包封率低，且药物易突释（burst release），血循环时间短，肿瘤组织的药物摄入不足。若制备出具有核壳结构的纳米粒子，将小分子化疗药物包载于内核中，即可克服以上的不足，提高药物包载效率，并有效降低突释，从而获得体循环长时间稳定的载药系统。但遗憾的是，常规制备技术无法制备核壳结构的纳米粒。