[发明专利]一株产西索米星突变菌株

说明书

技术领域

本发明属于抗生素制药领域，涉及一株产西索米星突变菌株，应用于抗生素制造。

背景技术

西索米星主要用于治疗由敏感的革兰阴性杆菌所致的严重感染，如铜绿假单胞菌、变形杆菌属（吲哚阳性和阴性）、大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属及枸橼酸杆菌属等所致的新生儿脓毒症、败血症、中枢神经系统感染（包括脑膜炎）、尿路生殖系统感染、呼吸道感染、胃肠道感染、腹膜炎、胆道感染、皮肤或骨骼感染、中耳炎、鼻窦炎、软组织感染、李斯特菌病等。

小单孢菌可产生丰富的次级代谢产物，特别是氨基糖苷类抗生素，如庆大霉素、西索米星和福提米星等。这些小单孢菌分布奇特，生长缓慢且细胞壁结构特殊，故研究进展缓慢。因此，要得到高产稳产的西索米星产生菌，极其困难。由于缺乏通用的基因操作系统，小单孢菌遗传操作困难，使得对其分子生物学的研究也大大落后于链霉菌。

依纽小单孢菌是西索米星产生菌。西索米星属氨基糖苷类抗生素，已在临床上应用了近半个世纪，是中国、乃至全世界抗感染必备的基本药物。西索米星产生菌属多组分代谢产物，但西索米星是其主要组分，其结构特点是分子中含有一个双键。西索米星（Sisomicin）是进一步合成抗耐药菌药物奈替米星(Netilmicin)的母体；最新研究发现，氨基糖苷类抗生素还具有抗HIV等功效。因此对该类稀有药用微生物进行深入研究，特别是分子遗传学方面的研究，生物合成基因的研究，次级代谢产物生产水平提高的研究等，都极具意义。

尽管人们对小单孢菌和西索米星的研究已近五十年，也取得了一些可喜的成果，但一直未有重大的突破。青霉素在五十余年的研究开发过程中，效价提高了近万倍，而西索米星四十年中仅提高了几十倍，差别非常悬殊。二十世纪八十年代兴起的链霉菌细胞工程，链霉菌基因工程，已在抗生素生物合成基因的克隆、产量提高、组分改善及杂合抗生素研究等方面取得了一定的进展，但在小单孢菌中的应用进展缓慢。

发明内容

本发明的目的在于提供一株高产西索米星的突变株。

本发明所述突变株为依纽小单孢菌（Micromonospora inyoensis）HP 388，已于2012年3月19日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No.5921。

本发明还提供了所述的产西索米星的突变株的发酵方法，依纽小单孢菌（Micromonospora inyoensis）HP388发酵前先用稀释平板法分离出单菌落后，再转接于斜面培养基，35-40℃培养2-5天；再以4-6%的接种量接种于种子培养基，35-40℃摇床培养18-48 h，转速为260-300rpm，然后按8-12%接种量转接于发酵培养基，35-40℃摇床培养4-5天，转速为260-300rpm；所述斜面培养基：以重量百分数计，可溶性淀粉1.0-2.0%，麸皮1.0-2.0%， MgSO₄·6H₂O 0.01-0.05%，KNO₃ 0.1-0.5%，K₂HPO₄ 3H₂O 0.01-0.05%，NaCl 0.01-0.09%，CaCO₃ 0.1-0.50%，琼脂1.8-2.2%，余量为水，pH7-8；种子培养基：以重量百分数计，葡萄糖0.1-1.0%，淀粉1.0-2.0%，玉米粉0.5-2.5%，蛋白胨0.1-0.8%，黄豆饼粉0.5-1.5%，KNO₃ 0.05-0.10%，CaCO₃ 0.1-0.5%，余量为水，pH6.5-7.5，发酵培养基：以重量百分数计，淀粉3.0-6.0%，玉米粉1.0-2.0%，蛋白胨0.1-0.8%，黄豆饼粉1.0-4.0 %，KNO₃ 0.01-0.10%，(NH₄)₂SO₄ 0.1-0.5%，CaCO₃ 0.1-0.5%，淀粉酶0.001-0.025%，余量为水，pH6.5-7.5。

本发明还提供了所述的突变菌株HP388在制备抗菌药物中的应用。

本发明通过以下反复持续筛选与驯化，最终得到了依纽小单孢菌HP388：菌株HP388的驯化筛选，需要多个循环，每个循环主要包括以下过程：