[发明专利]BRSK2在制备抑制胰腺癌的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药及基因工程领域，涉及神经极性分化相关基因——BRSK2的一种新用途。

背景技术

胰腺癌是由胰腺癌上皮恶变形成的恶性肿瘤，虽然其发病率仅排名恶性肿瘤的第13位，但是其致死率却在恶性肿瘤中位列第8位。根据世界卫生组织的统计，全世界每年有216 000多人确诊为胰腺癌。在我国该癌症发病率原很低，但近年也呈现逐年增多的趋势，近年来已经升至第5位。即使现在有化疗、放疗、手术等多种治疗方法，胰腺癌的生存率仍然不到5％。因为在出现初级症状时就已经伴有转移现象，所以被确认为胰腺癌时往往已经是临床晚期。因此只有10％的患者能够接受手术，而辅助疗法基本已经无能为力。造成胰腺癌的死亡率基本上与其发生率持平，五年生存率仅有5％。

AMP-活性相关激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)是一个高度保守的丝氨酸苏氨酸激酶，当细胞内能量下降时，AMPK经由其上游的激酶激活其催化区域的172位丝氨酸的磷酸化而被活化，因此又被称为能量变化感应器。根据AMPK激酶结构域氨基酸的保守性，Manning等人将BRSK1，BRSK2，AMPK等13个激酶归于AMPK亚家族。BRSK2是由申请人最早克隆出来的一个基因，刚开始认为其只在脑中表达，故起名为脑特异表达激酶2(Brain-specific kinase 2，BRSK2)，后来发现其不仅仅存在于脑里，在胰腺中也有表达。

BRSK2是申请人利用重要结构域同源筛选策略EST电子克隆技术，首先克隆并提交的新基因。前期对BRSK2的研究主要集中在它们在神经极化、突触形成以及递质释放等过程中起到的应用。小鼠中BRSK2的同源基因被命名为SAD-A以及SAD-B，单突变BRSK2的动物模型表型正常，但是双突变BRSK2的模型动物在出生后两个小时就死亡，解剖发现动物的大脑皮层比正常的要薄得多，并且神经元缺乏轴突以及树突。一个可能的机制是SAD通过磷酸化Tau，引起MAPs与微管蛋白结合不紧密，造成微管蛋白不能正常形成，最终对轴突形成造成影响。另外有研究表明，人的BRSK2是新的突触小泡和活动机制相关蛋白激酶，通过磷酸化其活动区蛋白和小泡引发因子RIM1，达到调节神经递质释放的功能。最新研究表明，除了在神经系统的中心起到调节神经极化、轴突树突形成等起到作用，BRSK2还能特异地定位于肌肉神经节点处，控制神经递质在周围神经系统的释放。

发明内容

本发明的目的是提供一种与神经分化极性相关的基因BRSK2的新作用，即其在制备胰腺癌药物中的作用。

本发明提供了神经元分化相关基因BRSK2(NCBI中氨基酸的序列号为AF533880，核苷酸的序列号为AAP97727)在制备胰腺癌药物中的应用。

实验表明，神经分化相关基因BRSK2可以作为体外筛选或者制备抑制胰腺癌的药物的药靶。

本发明通过对BRSK2的研究发现，BRSK2在正常人的脑和胰腺中有高表达，而通过免疫组化的方法对正常胰腺和胰腺癌组织的研究发现，BRSK2在胰腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织，组织芯片的结果进一步支持了该结论。采用蛋白质印迹技术在细胞学水平上检测多种胰腺癌癌细胞中BRSK2的表达，结果显示BRSK2在多株胰腺癌细胞中均有表达，该实验结果进一步证实了BRSK2在胰腺癌中有高表达。BRSK2能够促进胰腺癌生长，降低胰腺癌组织的坏死率；而抑制BRSK2能够抑制胰腺癌细胞增殖，大大提高胰腺癌组织的坏死率；因此，抑制BRSK2就能够有效抑制胰腺癌的发生发展，BRSK2可以作为筛选抑制胰腺癌的药物的药靶。

本发明还利用BRSK2成功的筛选到其抑制剂。以siRNA为例。选用有效干扰BRSK2蛋白表达的小RNA干扰PANC-1内源BRSK2之后，细胞在能量压力(糖饥饿)条件下的存活要低于对照组，裸鼠成瘤实验进一步证明了干扰BRSK2的PANC-1细胞的存活要低于未干扰BRSK2的细胞。由以上结果可认为BRSK2是胰腺癌细胞在恶劣条件下存活的重要调节基因，干扰BRSK2可以引起胰腺癌细胞在糖饥饿条件下的生长受到抑制。这进一步证明，BRSK2可以作为筛选抑制胰腺癌的药物的药靶。

所述的BRSK2的抑制剂，或者抑制胰腺癌的药物，包括抑制神经分化相关基因BRSK2的表达量或者活性的核酸、肽段或者小分子化合物。

所述的抑制胰腺癌的药物包括抑制神经分化相关基因BRSK2的表达量或者活性的DNA或者RNA。