[发明专利]BRSK2在制备诊断胰腺癌的试剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药及基因工程领域，涉及神经极性分化相关基因——BRSK2的一种新用途。

背景技术

胰腺癌是由胰腺癌上皮恶变形成的恶性肿瘤，虽然其发病率仅排名恶性肿瘤的第13位，但是其致死率却在恶性肿瘤中位列第8位。根据世界卫生组织的统计，全世界每年有216000多人确诊为胰腺癌。在我国该癌症发病率原很低，但近年也呈现逐年增多的趋势，近年来已经升至第5位。即使现在有化疗、放疗、手术等多种治疗方法，胰腺癌的生存率仍然不到5％。因为在出现初级症状时就已经伴有转移现象，所以被确认为胰腺癌时往往已经是临床晚期。因此只有10％的患者能够接受手术，而辅助疗法基本已经无能为力。造成胰腺癌的死亡率基本上与其发生率持平，五年生存率仅有5％。

AMP-活性相关激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)是一个高度保守的丝氨酸苏氨酸激酶，当细胞内能量下降时，AMPK经由其上游的激酶激活其催化区域的172位丝氨酸的磷酸化而被活化，因此又被称为能量变化感应器。根据AMPK激酶结构域氨基酸的保守性，Manning等人将BRSK1，BRSK2，AMPK等13个激酶归于AMPK亚家族。BRSK2是由申请人最早克隆出来的一个基因，刚开始认为其只在脑中表达，故起名为脑特异表达激酶2(Brain-specific kinase 2，BRSK2)，后来发现其不仅仅存在于脑里，在胰腺中也有表达。

BRSK2是申请人利用重要结构域同源筛选策略EST电子克隆技术，首先克隆并提交的新基因。前期对BRSK2的研究主要集中在它们在神经极化、突触形成以及递质释放等过程中起到的应用。小鼠中BRSK2的同源基因被命名为SAD-A以及SAD-B，单突变BRSK2的动物模型表型正常，但是双突变BRSK2的模型动物在出生后两个小时就死亡，解剖发现动物的大脑皮层比正常的要薄得多，并且神经元缺乏轴突以及树突。一个可能的机制是SAD通过磷酸化Tau，引起MAPs与微管蛋白结合不紧密，造成微管蛋白不能正常形成，最终对轴突形成造成影响。另外有研究表明，人的BRSK2是新的突触小泡和活动机制相关蛋白激酶，通过磷酸化其活动区蛋白和小泡引发因子RIM1，达到调节神经递质释放的功能。最新研究表明，除了在神经系统的中心起到调节神经极化、轴突树突形成等起到作用，BRSK2还能特异地定位于肌肉神经节点处，控制神经递质在周围神经系统的释放。

发明内容

本发明的目的是提供一种与神经分化极性相关的基因BRSK2的新作用，即其在制备诊断胰腺癌的试剂中的应用。

本发明提供了神经元分化相关基因BRSK2(NCBI中氨基酸的序列号为AF533880，核苷酸的序列号为AAP97727)在制备诊断胰腺癌的试剂中的应用。

实验表明，神经分化相关基因BRSK2可以作为体外诊断胰腺癌的分子标记。

本发明通过通过免疫组化的方法对正常胰腺和胰腺癌组织的研究发现，BRSK2在胰腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织，组织芯片的结果进一步支持了该结论。采用蛋白质印迹技术在细胞学水平上检测多种胰腺癌癌细胞中BRSK2的表达，结果显示BRSK2在多株胰腺癌细胞中均有表达，该实验结果进一步证实了BRSK2在胰腺癌中有高表达。BRSK2能够促进胰腺癌生长，降低胰腺癌组织的坏死率；而抑制BRSK2能够抑制胰腺癌细胞增殖，大大提高胰腺癌组织的坏死率，这些结果从另一个角度说明，BRSK2与胰腺癌的发生发展是密切联系的。因此，通过BRSK2可以作为诊断胰腺癌的辅助分子标记。

相应的，本发明提供了一种诊断胰腺癌的试剂盒，所述的试剂盒含有检测神经分化相关基因BRSK2的核酸或者蛋白含量的指示剂。该试剂盒还可含有检测蛋白含量所需的其他试剂，例如缓冲液、分子量标记等，还可以包括BRSK2标准浓度梯度样品及使用说明。

所述的指示剂是与神经分化相关基因BRSK2蛋白特异性结合的抗体，或者与BRSK2基因保守型结合的核酸。例如，实施例中所采用的扩增BRSK2的PCR引物以及定量PCR的引物，与BRSK2特异性结合的抗体，等，都可以用作指示剂。

实际操作中，可以利用该试剂盒检测神经分化相关基因BRSK2的含量，检测的方法包括如下步骤：

(1)取待测样品；

(2)利用上述试剂盒检测神经分化相关基因BRSK2的含量；

(3)与标准曲线对比，确定神经分化相关基因BRSK2的含量是否超过正常范围。

待测样品通常为离体的人或者动物的血样、细胞、组织或者器官的一部分，等等。也可以直接从死亡的人体或者动物体取样本检测。