[发明专利]一种HBD3 乳腺特异性表达载体及构建的重组细胞

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种位点特异性整合的表达载体，特别涉及一种HBD3乳腺特异性表达载体及构建的重组细胞。 

背景技术

乳房炎是奶牛中很常见的疾病，这种炎症是由多种病原微生物引起的，以大肠杆菌(E.coli)和葡萄球菌(S.aureus)为主(Bannerman DD，Paape MJ，Lee JW，Zhao X，Hope JC，Rainard P.Escherichia coli and Staphylococcus aureus elicit differential innate immune responses followingintramammary infection.ClinDiagn Lab Immunol.2004May；11(3)：463-72.)。乳房炎对奶业造成了巨大的经济损失，目前，治疗乳房炎仍以抗生素的投放为主，但抗生素价格昂贵；而且长期使用抗生素会使细菌产生抗药性，所以寻求一种新的治疗乳房炎的方法迫在眉睫。 

自身能够特异性的在乳房携带或者分泌乳房炎的因子，是解决奶牛乳房炎的理想方法，而这需要依赖于现代生物技术来构建转基因奶牛来实现。而应用体细胞克隆技术生产转基因动物已表现出强大的生命力(Jang G，Bhuiyan MM，Jeon HY，Ko KH，Park HJ，Kim MK，Kim JJ，Kang SK，Lee BC，Hwang WS.An approach for producing transgenic cloned cows by nuclear transferof cells transfectedwithhumanalphal-antitrypsingene.Theriogenology.2006Jun；65(9)：1800-12.Epub 2005Nov 21.)，其突出的优点是将转基因步骤提前到体细胞培养阶段，直接利用已确定的整合有目的基因的体细胞作为和供体细胞进行体细胞核移植(SCNT)，这样体细胞核移植前供体细胞的选择不但可以提高转基因动物的出生率还可以减低其生产成本(Wheeler MB，Walters EM.Transgenic technology and applications in swine.Theriogenology.2001Nov1；56(8)：1345-69.)。 

人β-防御素3(HBD3)是人体产生的一种大小为4-5kD的抗菌肽，由45个氨基酸组成，它具有光谱、强效的抗多种微生物感染的作用，特别是对金黄色葡萄球菌等阳性菌有强烈杀伤作用(Chen H，Xu Z，Peng L，Fang X，Yin X，Xu N，Cen P.Recent advances in the research and development of human defensins.Peptides.2006Apr；27(4)：931-40.Epub 2005Oct 13.)。目前已有从人扁桃体组织、人新鲜包皮组织、新鲜的人肝癌组织等组织中克隆到了HBD3的cDNA，并构建了各种HBD3表达载体，在大肠杆菌、人的某些细胞中得到表达。 

然而，现有的转基因动物生产技术仍然存在一定弊端：外源基因的随机插入带来的位置效应，即外源基因随机插入到与细胞重要生命活动相关的基因内部引起其异常表达，或者外源基因插入异染色质区造成外源基因表达沉默；体细胞核移植技术作为转基因动物生产的有效有段，其突出优点是将基因转移提前到体细胞培养阶段，可以有效的提高转基因动物的出生率和控制生产成本[M.B.Wheeler and E.M.Walters.Transgenic technology and applications in swine.Theriogenology2001，56(8)：1345-1369]，一般的，核供体细胞的准备需要经过药物筛选获得，而最终转基因细胞中抗生素筛选标记的残留，对转基因动物安全及环境安全造成了潜在的威胁。