[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的印迹膜传感电极

说明书

技术领域

本发明涉及电化传感器技术领域，尤其是涉及到一种用于检测黄曲霉毒素B1的基于丝网印刷技术的印迹膜传感电极的方法。

背景技术

黄曲霉毒素（AFT）是一种毒性极强的剧毒物质，曾被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为天然存在的一类致癌物。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡，在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。因此分析测定食品及饲料中黄曲霉毒素的含量水平对保障食品质量安全具有极其重要的意义。

目前检测食品及饲料中黄曲霉毒素的方法主要有薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱（HPLC）、以酶联免疫为基础的免疫分析、免疫亲和分析如微孔板酶联免疫吸附分析法（ELISA）以及生物传感器法等。

TLC法较为简单，费用低廉，但样品的前处理繁琐，提取和净化效果不够理想，灵敏度低、重现差，不适用现代分析的要求。HPLC法精度高、灵敏度高、能同时分析多种黄曲霉毒素类型，但该方法检测周期长、程序复杂，所需试剂繁多、操作时需要专门的技术人员，难以满足现代检测快速、简捷、现场的要求。免疫化学分析法中，酶联免疫吸附法特异性强、灵敏度高、成本低，适于批量检测食品和饲料，但是，酶本身的不稳定性，复杂样品受干扰，检测准确度不高；放射免疫法与酶免疫法类似，但放射免疫法存存放射污染，已被淘汰；亲合层析法近年发展较快的检测方法，但是价格昂贵，难以推广。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种检测黄曲霉毒素B1的印迹膜传感电极。本发明采用丝网印刷技术制作电化学生物传感电极，实现了微型化和集成化，在食品安全检验、生化分析以及其它领域具有较好的准确性和稳定性，通过它可以很快地检测出食品和饲料中的黄曲霉毒素B1含量，用于现场快速检测，具有很高的经济效益。

本发明的技术方案如下：

一种检测黄曲霉毒素B1的印迹膜传感电极，由下述制备步骤得到：

（1）取绝缘电极基片，涂覆分离的工作电极和对电极，所述工作电极为圆形，对电极为环绕工作电极的半圆环形；

（2）在所述绝缘电极基片上对应步骤（1）的工作电极和对电极，用导电浆分别印制依次连接的工作电极连线和接线端子以及对电极连线和接线端子；

（3）在所述工作电极连线以及对电极连线表面涂覆一层绝缘层；在所述工作电极以及对电极的表面涂覆一层黄曲霉毒素B1印迹膜；

（4）所述黄曲霉毒素B1印迹膜的制备方法如下：

 A、称取黄曲霉毒素B1模板分子与功能单体溶于有机溶剂中，混合均匀后加入交联剂和引发剂，经超声波震荡使其混合均匀，向该溶液中通入氮气除氧，密封待用；

B、将步骤A所得的溶液滴加到工作电极和对电极表面，盖玻片压盖，在1000W紫外光照射下进行聚合反应，合成含有黄曲霉毒素B1的分子印迹膜；

C、将步骤B所得的黄曲霉毒素B1分子印迹膜用体积比为4:1的氯仿-乙酸混合溶液经索氏提取器中反复洗脱黄曲霉毒素B1，直到最后一次洗脱液中检测不到模板分子存在，于双蒸水中保存备用；

所述黄曲霉毒素B1模板分子、功能单体与交联剂的摩尔比为1:6:35；所述引发剂的摩尔量为所述功能单体摩尔量的0.2~0.3%；所述有机溶剂的体积为所述黄曲霉毒素B1模板分子摩尔量的10倍，其中所述有机溶剂的体积以毫升为单位，所述黄曲霉毒素B1模板分子摩尔量以毫摩尔为单位。

所述功能单体为甲基丙烯酸、甲基丙烯酸胺、丙烯酰胺中的一种，优选甲基丙烯酸。所述有机溶剂为氯仿和甲苯的混合溶液，氯仿和甲苯的体积比为1:7。所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸、3，5-二丙烯酰胺基苯甲酸中的一种，优选乙二醇二甲基丙烯酸。所述引发剂为偶氮二异丁腈。所述电极基片的材质为聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯中的一种，其形状为片材或卷材；所述工作电极连线以及对电极连线表面涂覆的绝缘层的材质为聚氯乙烯。

将步骤A所得的溶液滴加到工作电极和对电极表面时，滴加的溶液体积为8~15ul，所形成的分子印迹膜为圆形，其直径为5~6mm，厚度为80~100um。步骤A中所述超声波震荡时间为5~20分钟；所述通入氮气除氧时间为5~15分钟；步骤B中所述紫外光照射下进行聚合反应时间为5~15分钟。

本发明有益的技术效果在于：