[发明专利]具有靶向抗血栓活性的RGDVYIGSR、制备和应用

说明书

本申请是2006年11月30日申请的申请号为200610144234.9，发明名称为“具有靶向抗血栓活性的多肽、其制备方法和应用”的专利的分案申请。

技术领域

本发明涉及具有靶向抗血栓活性的多肽RGDVYIGSR。本发明还涉及它的制备方法以及它作为抗血栓剂的应用，属于生物医药领域。

背景技术

细胞黏附在细胞黏附性疾病(癌转移、血栓形成、化学致炎和骨质疏松)的发展过程中起关键作用。调节性糖蛋白例如昆布氨酸、纤维蛋白原、RGD肽、YIGSR和YIGSK等都可以参与细胞黏附过程。它们与整合素受体有很强的结合能力。例如在血小板聚集过程中，RGDV与活化的血小板表面受体GP IIb/IIIa结合起至关重要的作用。RGDV与活化的血小板表面受体GP IIb/IIIa的特异性结合，赋予了RGDV一种重要性质，即RGDV可以向血小板活化的部位富集。在这样一个前提下，把RGDV与抗细胞黏附的YIGSR缀合，便可以获得靶向抗细胞黏附多肽。

发明内容

本发明的目的之一是对RGDV与YIGSR进行缀合，制备得到具有靶向抗血栓活性的多肽。

本发明的目的之二是提供一种制备抗血栓活性的RGDVYIGSR的方法。该方法包括：

1.采用液相合成方法，通过逐步接肽分别合成RGDV和YIGSR的保护中间体；

2.脱去RGDV保护中间体的C端保护基；

3.脱去YIGSR保护中间体的N端保护基；

4.把C端游离的RGDV保护中间体和N端游离的YIGSR保护中间体缀合，再脱去保护基得到RGDVYIGSR。

其中，所述的N端保护基是对多肽的N端进行保护时所常用的保护基团，例如可以是叔丁氧羰基(Boc)；所述的C端保护基是对多肽的C端进行保护时所常用的保护基团，例如可以是苄氧基(OBzl)，甲氧基(OMe)等。

以上所述的液相合成中间体并加以保护的方法是本领域的常规并公知的技术。

动物模型试验证明，本发明的RGDVYIGSR具有较强的抗血栓活性。

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

本发明中所出现的缩略语的说明：

THF                    四氢呋喃

DCC                    二环己基酰亚胺

DCU                    二环己基脲

OBzl                   苄氧基

Boc                    叔丁氧羰基

OMe                    甲氧基

HOBt                   N-羟基苯并三唑

NMM                    N-甲基吗啉

具体实施方式

实施例1 HCl·Tyr-Ile-Gly-Ser(Bzl)-Arg(NO₂)-OMe的制备

1)Boc-Ser(Bzl)-Arg(NO₂)-OMe的制备

将0.59g(2.0mmol)Boc-Ser(Bzl)溶解在6ml无水THF中，0℃下加入0.27g(2.0mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和0.45g(2.2mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)。搅拌10分钟后加入0.539g(2.0mmol)HCl·Arg(NO₂)-OMe的无水THF溶液。反应混合物用N-甲基吗啉(NMM)调节pH 8-9，0℃搅拌24小时。停止反应，过滤除去沉淀出的二环己基脲(DCU)。滤液减压浓缩，残留物溶于乙酸乙酯中，得到的溶液依次用饱和NaHCO₃水溶液、5％KHSO₄水溶液和饱和NaCl水溶液洗。乙酸乙酯层用无水NaSO₄干燥3小时。滤除NaSO₄，滤液减压浓缩除去乙酸乙酯。残留物用柱层析分离(CHCl₃∶CH₃OH，30∶1)，得到0.969g(95％)目标化合物。ESI-MS(m/z)511[M+H]⁺。

2)HCl·Ser(Bzl)-Arg(NO₂)-OMe的制备