[发明专利]基于物理化学相结合的新型多糖硫酸化方法

权利要求书

1.基于物理化学相结合的新型多糖硫酸化方法，其特征在于按以下步骤进行：

1)以香菇多糖作为参与反应的底物，香菇胞外多糖通过气升式发酵产生的发酵液中提取，纯化而获得的均一纯品多糖；

2)硫酸化试剂的制备：采用取代率较高的硫酸化体系——氯磺酸-吡啶体系：将氯磺酸缓慢滴加到装有吡啶的容器中，滴加过程应在冰盐浴中进行，并用磁力搅拌器搅拌，控制温度在0摄氏度至4摄氏度以防过热；

3)微波辅助法：将纯品多糖溶解在甲酰胺中，硫酸化试剂缓慢滴加，搅拌均匀，利用微波炉进行反应，反应结束后，混合液调节至pH中性，并用酒精沉淀，离心复溶于水，浓缩透析，冻干，获得硫酸化产品；

4)红外检测：KBr压片法傅立叶红外光谱仪检测，400-4000cm^-1观察硫酸取代的特殊峰；

5)SD检测：碳水化合物含量的检测采用苯酚硫酸法，硫酸根含量的检测采用氯化钡明胶法；

6)体外抗氧化活性的检测

超氧根自由基清除能力：模拟黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应体系产生超氧阴离子自由基，加入电子传递物质和griess显色剂，在550nm比色，测试管中加入不同浓度的样品，计算样品的超氧阴离子清除能力；

氢氧根自由基清除能力：利用fenton反应产生羟自由基，给与电子受体后，用griess显色，550nm比色，测试管中加入不同浓度的样品，计算样品的羟基阴离子清除能力。