[发明专利]微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶的方法无效
| 申请号： | 201210106743.8 | 申请日： | 2012-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN102653733A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 迟乃玉;张庆芳;马莉 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02 |
| 代理公司： | 大连智慧专利事务所 21215 | 代理人： | 刘琦 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微生物 发酵 生产 低温 超氧化物歧化酶 方法 | ||
1.一种微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶的方法，包括以下步骤：
(1)将产生超氧化物歧化酶的微生物逐级低温驯化，驯化温度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低温环境下生长良好；
(2)按常规方法将低温驯化后的超氧化物歧化酶产生菌在10～16℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；
(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的3～9％接种量接入液体发酵培养基中，在10～16℃培养72～144h时，即微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶结束；
(4)将(3)的发酵液4,000～8,000rpm离心收集菌体，用蒸馏水洗涤数次之后离心收集沉淀；
(5)将沉淀悬浮于缓冲液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm离心，收集到的上清为超氧化物歧化酶粗酶液；
(6)根据不同需要和使用对象不同，还可以将(5)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，在步骤(6)之后进一步包括：将步骤(6)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中菌种低温驯化培养基、液体种子培养基、产酶培养基分别为：
(1)菌种低温驯化培养基：葡萄糖8.0～16.0g，牛肉膏10.0～25.0g，蛋白胨3.0～12.0g，酵母粉2.0～9.0g，琼脂10.0～30.0g，蒸馏水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。
(2)液体种子培养基：葡萄糖5.0～15.0g，牛肉膏8.0～20.0g，蛋白胨5.0～15.0g，酵母粉2.0～10.0g，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。
(3)发酵产酶培养基：葡萄糖10.0～30.0g，(NH4)2SO43.0～10.0g，玉米浆5.0～15.0g，酵母粉2.0～8.0g，CaCO31.0～6.0g，MgSO40.1～0.9g，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。
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