[发明专利]一种双报告基因重组腺病毒载体及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种重组腺病毒载体，其特征在于它含有人转铁蛋白受体基因和萤火虫荧光素酶基因，能在真核细胞中同时表达转铁蛋白受体蛋白和荧光素酶蛋白，所述人转铁蛋白受体基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所述。

2.根据权利要求1所述的重组腺病毒载体，其特征在于编码转铁蛋白受体蛋白的基因在第一巨细胞病毒启动子的控制下表达，编码荧光素酶蛋白的基因在第二巨细胞病毒启动子的控制下表达，所述第一巨细胞病毒启动子和第二巨细胞病毒启动子为相同的巨细胞病毒启动子。

3.据权利要求1或2所述的重组腺病毒载体，其特征在于编码转铁蛋白受体蛋白的基因序列和编码荧光素酶蛋白的基因序列被分别放置在两个阅读框架内，所述人转铁蛋白受体基因的表达读码框包含巨细胞病毒启动子、人转铁蛋白受体基因和下游的polyA加尾信号；所述萤火虫荧光素酶基因的表达读码框包含巨细胞病毒启动子、萤火虫荧光素酶基因和下游的polyA加尾信号。

4.一种重组腺病毒载体的构建方法，其特征在于依次为以下步骤：

(1)用PCR方法扩增人转铁蛋白受体基因；(2)将步骤(1)扩增的人转铁蛋白受体基因片段插入到含有萤火虫荧光素酶基因片段的穿梭载体pShuttle-CMV-Luciferase上，获得重组穿梭载体pShuttle-CMV-TFRC-CMV-Luciferase，并进行测序分析；(3)将验证正确后的重组穿梭载体pShuttle-CMV-TFRC-CMV-Luciferase连接到骨架载体pAdeno上，得到重组腺病毒质粒pAdeno-CMV-TFRC-CMV-Luciferase；(4)对所述重组腺病毒质粒进行XhoI酶切鉴定；(5)用人胚肾细胞系HEK293细胞包装所述重组腺病毒质粒，获得重组腺病毒载体Ad-CMV-TFRC-CMV-Luciferase。

5.权利要求1至3中任一权利要求所述重组腺病毒载体在磁共振和光学双模态成像中作为肿瘤示踪剂的应用。