[发明专利]一种快速检测马鹿源性鹿产品的PCR试剂盒

说明书

技术领域：

本发明公开一种快速检测马鹿源性鹿产品的PCR试剂盒，特别涉及检测鹿产品中是否含有马鹿产品的成分。用于快速准确识别鹿产品，属于生物检测试剂盒技术领域。

背景技术：

鹿产品是鹿的一些组织或者器官，主要包括有：鹿茸，鹿心，鹿肾，鹿胎，鹿筋，鹿鞭，鹿尾，鹿肉和鹿血等。由于鹿产品大多为名贵中药材，价格昂贵，所以市场上屡见用伪劣产品来冒充名贵的鹿产品。

目前，鹿产品的鉴定大多采用传统方法，主要包括性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定。虽然传统鉴定方法简单、快捷、成本低，但影响传统鉴定方法的因素很多（如人为因素、环境因素、营养因素），因而不能准确地判断鹿产品的伪劣情况。比如在鹿产品的加工过程中，其性状、显微结构、理化性质等常常发生改变，利用传统鉴定方法来鉴定鹿产品可能会出现误判。然而，分子鉴定方法（基于DNA的方法）不受这些因素的影响，且具有准确性大、灵敏度高、稳定性好、通用性强等特点。

发明内容：

本发明提供一种快速检测马鹿源性鹿产品的PCR试剂盒，解决了鹿产品中是否含有马鹿成分的问题。

本发明还提供了上述快速检测鹿产品的PCR试剂盒的制备方法，通过一个PCR方法反应体系采用一步反应来鉴别鹿产品中的马鹿源性成分。

本发明提供的快速检测马鹿源性鹿产品的PCR试剂盒，其特征在于：

包括DNA提取液、PCR反应液和阴性标准品：

所述的DNA提取液：

（1）低盐缓冲液（pH 7.6-7.8）：12-13份Tris碱（三羟甲基氨基甲烷），32-35份 Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二钠），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份为水；

（2）细胞裂解液：4-6份 SDS十二烷基硫酸钠，4-6份Triton X-100(聚乙二醇对异辛基苯基醚)，1000份低盐缓冲液；

所述的PCR反应液：

ddH₂O 、10 × PCR Buffer 、dNTPs 、上游引物、下游引物、Taq酶；

具体引物序列为：

上游引物：5’- CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG -3’

下游引物：5’- CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

阴性标准品：为无菌双蒸水。

本发明所述快速检测马鹿源性鹿产品的PCR试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1）DNA提取液

（1）低盐缓冲液（pH 7.6-7.8）：12-13份Tris碱（三羟甲基氨基甲烷），32-35份 Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二钠），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份为水；

（2）细胞裂解液：4-6份 SDS十二烷基硫酸钠，4-6份Triton X-100(聚乙二醇对异辛基苯基醚)，1000份低盐缓冲液；

2）PCR反应液。

（1）引物设计：在马鹿的线粒体DNA D-loop区域，设计一对特异性引物，包括一个上游引物和一个下游引物。序列如下：

上游引物：5’- CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG -3’

下游引物：5’- CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

（2）PCR反应液：

ddH₂O  9.3ul，10 × PCR Buffer  1.5ul，dNTPs(100 uM)  2.0ul，上游引物(20 uM)  0.5ul，下游引物 (20 uM)   0.5ul，Taq酶(5U/ul)   0.2ul。

（3）阴性标准品：为无菌双蒸水。

本发明的马鹿源性鹿产品PCR检测的使用方法：

（1）从待检样品中提取基因组DNA；

（2）制备PCR反应体系：

取步骤(1)中的DNA 1ul和阴性对照加入到PCR反应液中，用PCR仪进行扩增；

（3）设定反应程序进行PCR扩增，反应程序均如下：

94℃  5min；94℃  30s，62℃  30s，72℃  30s， 72℃  5min，扩增30个循环。

（4）反应结束后取5 μl PCR产物在1%琼脂糖凝胶电泳进行分析，紫外灯下观察结果。