[发明专利]快速检测鹿源性鹿产品真伪的PCR试剂盒及制备方法

权利要求书

1. 一种快速检测鹿源性鹿产品真伪的PCR试剂盒，其特征在于包括以下引物：

上游引物：5’- CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’

下游引物：5’- CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’ 。

2. 权利要求1所述的快速检测鹿源性鹿产品真伪的PCR试剂盒，其特征在于包括DNA提取液、PCR反应液和阴性标准品：

所述的DNA提取液：

（1）低盐缓冲液（pH 7.6-7.8）：12-13份Tris碱（三羟甲基氨基甲烷），32-35份 Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二钠），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份为水；

（2）细胞裂解液：4-6份 SDS十二烷基硫酸钠，4-6份Triton X-100(聚乙二醇对异辛基苯基醚)，1000份低盐缓冲液；

所述的PCR反应液：

ddH₂O 、10 × PCR Buffer 、dNTPs 、上游引物、下游引物、Taq酶；

具体引物序列为：

上游引物：5’- CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’

下游引物：5’- CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

阴性标准品：为无菌双蒸水。

3. 权利要求1所述的快速检测鹿源性鹿产品真伪的PCR试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1）DNA提取液

（1）低盐缓冲液（pH 7.6-7.8）：12-13份Tris碱（三羟甲基氨基甲烷），32-35份 Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二钠），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份为水；

（2）细胞裂解液：4-6份 SDS十二烷基硫酸钠，4-6份Triton X-100(聚乙二醇对异辛基苯基醚)，1000份低盐缓冲液；

2)PCR反应液

（1）引物设计：

引物设计：在梅花鹿，赤鹿，马鹿，塔里木马鹿和驯鹿线粒体D-loop区设计引物，包括一个上游引物和一个下游引物；序列如下：

上游引物：5’- CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’

下游引物：5’- CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

（2）PCR反应液：

ddH₂O  9.3ul，10 × PCR Buffer  1.5ul，dNTPs(100 uM)  2.0ul，上游引物(20 uM)  0.5ul，下游引物 (20 uM)   0.5ul，Taq酶(5U/ul)   0.2ul；

（3）阴性标准品：为无菌双蒸水。