[发明专利]海洋微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵生产低温SOD的方法，其包括以下步骤：

(1)将产生超氧化物歧化酶的海洋微生物进行定向驯化，使其在自然条件下生长良好；

(2)按常规方法将定向驯化后的超氧化物歧化酶产生菌在8～14℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；

(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的4～10％接种量接入液体发酵培养基中，在8～14℃培养60～96h时，即海洋微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶结束；

(4)将(3)的发酵液4,000～8,000rpm离心收集菌体，用蒸馏水洗涤数次之后离心收集沉淀；

(5)将沉淀悬浮于缓冲液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm离心，收集到的上清为超氧化物歧化酶粗酶液；

(6)根据不同需要和使用对象不同，还可以将(5)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，在步骤(6)之后进一步包括：将步骤(6)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中菌种定向驯化培养基、液体种子培养基、发酵产酶培养基分别为：

(1)菌种定向驯化培养基：葡萄糖8.0～16.0g，牛肉膏12.0～24.0g，蛋白胨4.0～12.0g，酵母粉2.0～8.0g，NaCl 5.0～10.0g，琼脂15.0～30.0g，蒸馏水1.0L，p值7.0，121℃高压蒸汽灭菌30min。

(2)液体种子培养基：葡萄糖8.0～15.0g，牛肉膏8.0～16.0g，蛋白胨5.0～15.0g，酵母粉2.0～10.0g，NaCl 5.0～10.0g，自来水1.0L，pH值7.0，121℃高压蒸汽灭菌30min。

(3)发酵产酶培养基：葡萄糖15.0～25.0g，(NH₄)₂SO₄3.0～10.0g，玉米浆5.0～15.0g，酵母粉2.0～8.0g，NaCl 5.0～10.0g，CaCO₃1.0～6.0g，MgSO₄0.1～0.9g，自来水1.0L，pH值7.0，121℃高压蒸汽灭菌30min。