[发明专利]一种基于光学DNA生物传感器的1,8-二氨基萘的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学和DNA生物传感技术领域，涉及一种基于光学DNA生物传感器的1，8-二氨基萘的检测方法，能快速有效的实现对1，8-二氨基萘的检测。 

背景技术

芳香胺是一类重要的环境污染物，已被列为优先监控的环境污染物之一。在工业上芳香胺用途非常广泛，作为重要的化工原料和精细化工中间体，常被用于印染、制药、医药、农药、塑料、橡胶、纺织、陶瓷上釉和油漆等工艺生产过程，尤其是印染工业，废水常含高浓度的芳香胺中间体，而且部分染料经过复杂的化学反应和微生物作用最终也会释放出芳香胺污染物，从而造成环境的污染。此外，芳香胺化合物进入人体后经过体内的酶的活化作用可对DNA造成损害，引起DNA突变，从而诱发癌症等恶性疾病(如导致膀胱癌、输尿管癌、肾癌)，对人类的健康危害极大。 

芳香胺的分析检测方法有很多种，如气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法等，这些方法能同时定量测定多种芳香胺污染物，具有高效灵敏等特点，但是具有设备昂贵、需专业技术人员操作、样品处理繁琐等缺点。随着电化学技术和DNA生物传感技术的发展，DNA生物传感器作为一种新型的检测技术亦被用于检测芳香胺污染物。Wang等应用天然小牛胸腺DNA修饰的碳糊电极生物传感器，实现了对2-氨基荼、1-氨基蒽、2-氨基蒽、9，10-二氨基菲、1-氨基吡等芳香胺类污染物的检测。Chiti等采用天然DNA和含人工合成的含23个碱基的DNA片段修饰的丝网石墨印刷电极传感器，对芳香胺2-氨基萘、2-氨基蒽、1，2-二氨基蒽醌、吖啶黄等化合物进行了检测。Prabhakar等应用天然小牛胸腺DNA修饰的聚吡咯-聚氯乙烯磺酸盐/氧化铟膜电极传感器，用循环伏安法对芳香族化合物2-氨基蒽进行了检测。然而，以DNA作为分子识别主体对芳香胺化合物的检测多是采用DNA修饰电极传感器的方法，虽然这些DNA生物传感器对芳香胺类污染物具有较高的灵敏性，但其不足之处是电极制备时间较长，成本相对较高。研究发现，G-DNA是一类具有类过氧化物酶的催化活性的DNA片段，在双氧水存在条件下G-DNA结构能催化双氧水氧化鲁米诺产生化学发光，具有响应时间快，专一性高等特点。Li等应用G-DNA类过氧化物酶的催化活性成功实现了对重金属离子Ag⁺及Pb²⁺的检测，Xiao等基于此机理实现了对目标DNA链的检测，Liu等应用凝血酶及ATP等小分子可以诱导G-DNA结构的形成，亦成功实现了对其的检测。到目前为止，应用G-DNA催化鲁米诺化学发光对芳香胺类化合物的检测还未见报道，与DNA修饰固体电极式传感器方法相比，此法无需将DNA修饰到电极表面，大大缩短的周期，同时降低了成本，检测的响应速度亦明显提高。 

综上所述，建立、完善和发展芳香胺污染物的分析方法是分析化学和环境化学的热点研究课题，也是环境综合治理的关键环节之一，具有重要的研究意义。同时开发一种新的高灵敏、低成本的检测方法对完善现有检测技术手段亦具有重要意义和较好的应用价值。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于光学DNA生物传感器的快速检测1，8-二氨基萘的方法。 

本发明的技术方案如下： 

一种基于光学DNA生物传感器的1，8-二氨基萘的检测方法，包括以下步骤： 

1)将固体hairpin DNA用pH＝8.0，20mM Tris-NaClO₄缓冲溶液溶解并稀释到一定浓度，并用漩涡振荡器混匀，静置于室温下6h，备用； 

2)取适量上述步骤1)配制的hairpin DNA溶液加到冻存管中，并向其中加入一定浓度的1，8-二氨基萘溶液，放置30min； 

3)向上述步骤2)体系中加入一定浓度的K⁺及hemin溶液，放置1h； 

4)向上述步骤3)体系中加入一定浓度的H₂O₂及鲁米诺溶液，进行化学发光测定。 

优选地，上述步骤1)中所述hairpin DNA双链部分碱基对数为9对。 

优选地，上述步骤2)中所述hairpin DNA浓度为100nM。 

优选地，上述步骤3)中所述K⁺浓度为10mM。 

优选地，上述步骤3)中所述hemin浓度为1μM。 

优选地，上述步骤4)中所述H₂O₂浓度为300μM。