[发明专利]一种基于电化学DNA生物传感器的1,8-二氨基萘的测定方法

权利要求书

1.一种基于电化学DNA生物传感器的1，8-二氨基萘的测定方法，其特征在于包括以下步骤：

1)电极的预处理与活化：

将金电极在鹿皮抛光布上用0.05μm的α-Al₂O₃粉末抛光至镜面，抛光后先洗去表面污物，并依次在乙醇和去离子水中超声清洗，每次2～3min，重复三次；然后在0.5mol/L H₂SO₄溶液中经循环伏安扫描至稳定，最后用去离子水冲洗干净，氮气吹干，得到表面干净的金电极；

2)Hairpin DNA溶液的配制：

将固体hairpin DNA药品用pH＝7.4的高离子强度Tris-NaClO₄缓冲溶液溶解并稀释到一定浓度，并用漩涡振荡器混匀，于室温下静置12h以备用；

3)Hairpin DNA修饰电极的制备：

将上述步骤1)活化处理的金电极浸泡在上述步骤2)配制的hairpin DNA溶液中，静置于室温下4-5天。巯基修饰的hairpin DNA通过Au-S键作用自组装于金电极表面，从而得到hairpin DNA修饰电极。

2.如权利要求1所述的hairpin DNA修饰的金电极的制备方法，其特征在于：所述Tris-NaClO₄缓冲溶液中Tris浓度为20mM，NaClO₄浓度为300mM。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所使用的hairpin DNA为5′端双硫修饰的含30个碱基的hairpin DNA序列。其中共包含三部分：hairpin DNA序列靠近5′端的前9个碱基胸腺嘧啶为柔性间隔基团，用以保持hairpin结构的双链部分及hairpin DNA结构的“环”状部分。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：hairpin DNA的“茎”部分匹配的碱基为5对。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述hairpin DNA的浓度为5μM。

6.一种应用如权利要求1-4中任一项所述制备方法得到的hairpin DNA修饰电极对1，8-二氨基萘检测的方法，其特征在于具体步骤为：以Ag/AgCl(饱和KCl溶液)为参比电极，铂电极为对电极，以hairpin DNA修饰电极为工作电极构筑三电极体系，将hairpin DNA修饰电极在K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆](2mM)溶液中进行电化学阻抗测量，测完后用缓冲溶液淋洗，然后置于缓冲溶液Tris-NaClO₄(20mM，pH＝7.4)配制的一定浓度的1，8-二氨基萘溶液中20min，然后再进行电化学阻抗测定，比较作用前后阻抗值的变化。

7.如权利要求6所述的hairpin DNA修饰电极在水中对1，8-二氨基萘的检测。