[发明专利]一种截短侧耳素晶体的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药中间体制备技术领域，特别是涉及一种泰妙菌素合成中间体截短侧耳素晶体的制备方法。

背景技术

截短侧耳素（Pleuromutilin）是由侧耳菌（Pleurotus mutilus）和帕氏侧耳菌产生的一类广谱的二萜烯类抗生素，是合成延胡索酸泰妙菌素的前体。它具有良好的抗菌活性，能够有效抑制大部分革兰阳性菌以及部分革兰氏阴性菌，被广泛用于兽药临床中。近年来，研究人员对截短侧耳素C~14位进行结构修饰，获得了对细菌和支原体的抑菌活性有所增强的衍生物，如：泰妙菌素，沃尼妙林，瑞他莫林等。因此，对截短侧耳素进行提取纯化是生产上述产品的关键步骤。

目前，截短侧耳素的获得大多是采用将发酵液中的截短侧耳素提取纯化，然后经离心得到截短侧耳素产品。有关文献以及公开的专利报道的提取截短侧耳素的方法还有如下几种：（1）干菌丝采用MIBK（甲基异丁基甲酮）浸取，处理得粗品；粗品用甲醇溶解，浓缩洗涤最后得截短侧耳素成品；（2）干菌丝直接采用MIBK萃取，浓缩，浓缩液直接转入泰妙菌素合成；（3）菌丝干燥过滤后，用醋酸丁酯萃取，浓缩结晶至截短侧耳素成品；（4）采取甲醇或乙醇提取，浓缩，降温结晶至成品。

上述工艺均较为简单，但是最终所获得的产品杂质含量较高，纯度较低，对后工序产品影响较大。 

发明内容

针对上述延胡索酸泰妙菌素的中间体产品杂质含量较高，检测困难等诸多问题，本发明提供一种制备方法简单，产品收率高，纯度高，容易实现的截短侧耳素晶体的制备方法。

本发明所采用的技术方案如下：

一种截短侧耳素晶体的制备方法，其特征是：将截短侧耳素干菌丝用丙酮浸提，浸提液浓缩至基本无丙酮，待有晶体析出时降温结晶、离心、真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品，然后将粗品用甲醇溶液溶解，活性炭脱色，浓缩至有晶体析出时降温结晶，离心分离，用冷石油醚洗涤，真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素晶体。

其中截短侧耳素晶体粗品提取包括以下步骤：

（1）浸提

将截短侧耳素干菌丝用丙酮浸取两次，浸取后离心分离，将两次所得的浸取液合并。第一次浸提每1g截短侧耳素干菌丝加入 5~7L的丙酮，浸提时间为3~4小时；第二次浸提每1g截短侧耳素干菌丝加入2~4L的丙酮，浸提时间为1小时；

（2）浓缩

浸提液转入真空浓缩器，在50~60℃以下真空搅拌至基本无丙酮，真空度控制在-0.04~-0.06MPa；

（3）降温结晶、离心、干燥

将浓缩液转入结晶罐，缓慢降温至0~5℃，此时析出大量黄色结晶颗粒，继续保温5小时，充分结晶后，离心分离，50~55℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素粗品。

截短侧耳素晶体制备包括如下步骤：

（1）溶解

将截短侧耳素粗品用甲醇溶解，加入甲醇的体积为粗品质量的4~5倍，加热至溶解完全；

（2）脱色

向溶解液中加入粗品重量的1~2%的活性炭，脱色0.5~1小时，过滤；

（3）浓缩

将滤液转入真空浓缩器，真空浓缩蒸发至原体积的30~40%，此时有晶体析出；

（4）降温结晶，分离，用冷石油醚洗涤，干燥

将浓缩液转入结晶罐，缓慢降温到0~5℃，析出白色晶体，保温反应5小时，充分结晶，用离心机离心分离，加入晶体质量10倍的冷石油醚洗涤，60~70℃真空干燥至干燥失重低于1%，得截短侧耳素晶体。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

（1）国内丙酮的市场价格为6～7元/kg，而MIBK的市场价格为60～70元/kg，醋酸丁酯的市场价格为9～10元/kg，本发明采用丙酮浸提制备截短侧耳素粗品代替了原有工艺的MIBK或醋酸丁酯浸提制备粗品，大大降低了溶剂的使用成本，提高了企业的经济效益。同时，采用MIBK或醋酸丁酯浸提，其提取收率为80～90%；而采用丙酮，其提取收率＞90%，详细数据见实施例。

（2）本发明提取纯化工艺条件温和，容易实现，易于操作。

（3）本发明采用的溶媒较少，操作简单，不仅降低了杂质的引入，使产品纯度高于98%，而且很大程度上降低了能耗，减少了溶媒回收的困难，减少了废物的排放。

（4）本发明是环保型的提取纯化工艺，所采用的溶媒可以循环利用，对环境影响较小，有一定的发展前景。

具体实施方式