[发明专利]一种从广金钱草中制备夏佛塔苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种从广金钱草中制备夏佛塔苷的方法。

背景技术

广金钱草为豆科植物广金钱草Desmodium styracifolium （Osb.）Merr.的地上部分，又叫落地金钱草、假花生、山地豆。具有清热除湿，利尿通淋功效，传统医学用于治疗热淋，砂淋，石淋，小便涩痛，水肿尿少，黄疸尿赤，尿路结石。现代研究表明，广金钱草中含有大量黄酮类物质，具有显著的抗炎、镇痛、抗血小板凝聚作用。其中夏佛塔苷为广金钱草中的指标性成分，药典-2010版规定其含量不得少于0.13%。

夏佛塔苷（Schaftoside）为黄酮类物质，CAS号51938-32-0，分子式C26H28O14，分子量564.49，结构式：

。

通过文献检索，从广金钱草中制备夏佛塔苷的方法，多为固体填充柱法。如文献“广金钱草的生物活性成分研究” 公开的方法是广金钱草的水提取物经过大孔吸附树脂60％乙醇洗脱物进行了研究，经反复硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ODS、Sephadex LH-20、制备薄层和反复重结晶等手段从广金钱草中分离得到包括夏佛塔苷在内的14个化合物。还有王植柔等发表的“广金钱草化学成分的提纯夏佛塔苷的方法。如上所述，现有方法操作复杂，尤其是硅胶柱层析重现性较差，制备量较小，收率低，不适合制备夏佛塔苷。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种从广金钱草中制备夏佛塔苷的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种从广金钱草中制备夏佛塔苷的方法，其特征在于以下步骤：

i.取广金钱草粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解4-7天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩得粗提物；

ii.把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得夏佛塔苷。

步骤i中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的1-5‰。

步骤i中所述的超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素超滤膜，纳滤膜为截留分子量100-400的中空纤维素纳滤膜。

步骤ii中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选乙酸乙酯、正丁醇、水组合，比例为3-5:1-2:4-7，下相为流动相，上相为固定相。

本发明采用生物酶发酵，可以缩短提取周期，提高提取率。

本发明采用膜过滤技术分离，物理方法除杂，操作简单，不污染环境。

本发明采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，制备量大。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

取纤维酶10g溶于5L水，加入粉碎的5kg广金钱草中拌匀，常温酶解5天，酶解原料用70℃温水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液过滤后用截留分子量2000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量200的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积乙酸乙酯萃取3次，萃取液浓缩得粗提物20g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:1:4混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色夏佛塔苷1.4g，经HPLC检测，纯度98.2%。

实施例2：

取淀粉酶5和果胶酶10g溶于5L水，加入粉碎的5kg广金钱草中拌匀，常温酶解4天，酶解原料用60℃温水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量300的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积乙酸乙酯萃取3次，萃取液浓缩得粗提物12g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:2:5混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色夏佛塔苷1.5g，经HPLC检测，纯度98.7%。