[发明专利]一种微阵列透析室及利用该透析室的富集培养方法

权利要求书

1.一种微阵列透析室，其特征在于：包括上盖板(1)、下盖板(2)及夹设固定在上、下盖板之间的中心板(3)，在所述上、下盖板(1、2)及中心板(3)上分别设有上下严格对齐的微孔阵列(4)，在上盖板(1)的微孔阵列与中心板(3)的微孔阵列之间夹设有第一微孔滤膜(51)，在下盖板(2)的微孔阵列与中心板(3)的微孔阵列之间夹设有第二微孔滤膜(52)，所述中心板(3)的微孔阵列中的各微孔被所述的第一微孔滤膜(51)和第二微孔滤膜(52)隔离成独立的透析室。

2.根据权利要求1所述的微阵列透析室，其特征在于：所述微孔阵列(4)中各微孔的孔径为1～2mm。

3.根据权利要求1或2所述的微阵列透析室，其特征在于：所述的上、下盖板(1、2)及中心板(3)均为长方形，在上、下盖板(1、2)及中心板(3)上沿各自长度方向分别设有两个所述的微孔阵列(4)，且所述的微孔阵列(4)为圆形，对应地，所述的第一微孔滤膜(51)和第二微孔滤膜(52)也均为圆形。

4.根据权利要求3所述的微阵列透析室，其特征在于：所述微孔阵列(4)的直径为25mm，所述第一微孔滤膜(51)中各微孔的孔径及所述第二微孔滤膜(52)中各微孔的孔径均为0.1μm。

5.根据权利要求1或2所述的微阵列透析室，其特征在于：在所述上盖板(1)的上表面及下盖板(2)的下表面均开有圆形凹槽(6)，所述上、下盖板(1、2)上的微孔阵列(4)分别成型于各自所在盖板的圆形凹槽(6)的底部。

6.根据权利要求1或2所述的微阵列透析室，其特征在于：所述的上、下盖板(1、2)及中心板(3)均采用聚甲醛板。

7.一种利用权利要求1所述的透析室的富集培养方法，其特征在于包括如下步骤：

(一)、将样品按不同浓度梯度稀释后分别与一培养基充分混合并分别接种于所述透析室内，之后对不同浓度梯度稀释下的样品分别进行原位培养和模拟原位培养；

(二)、获取上述经原位培养和模拟原位培养后的样品，并分别溶解于灭菌生理盐水以制成原位培养下的原浓度菌液和模拟原位培养下的原浓度菌液，再将上述两原浓度菌液分别进行平板涂布培养；

(三)、结合稀释平板计数法和DAPI荧光染色计数法，分别计算在原位培养下和在模拟原位培养下所述透析室对应不同浓度梯度时的可培养率，并采用DGGE凝胶电泳检测技术分别分析样品在原位培养和模拟原位培养下对应不同浓度梯度稀释时的微生物多样化差别。

8.根据权利要求7所述的富集培养方法，其特征在于根据步骤(三)的可培养率求得最佳稀释培养浓度，并分析不同培养基在上述最佳稀释培养浓度下的可培养率和微生物多样性。

9.根据权利要求7或8所述的富集培养方法，其特征在于步骤(三)中所述的DGGE凝胶电泳检测包括如下三个步骤：

①、采用化学裂解法与酶溶法相结合提取DNA；

②、将DNA模板稀释50倍后取0.2μL对16S rDNAV3-V5区序列进行PCR扩增；

③、对PCR产物进行DGGE电泳检测。

10.根据权利要求7所述的富集培养方法，其特征在于所述菌株的培养基为LB固体培养基，该LB固体培养基包括有0.7％琼脂、0.5％酵母提取物、1％胰蛋白胨及1％氯化钠。