[发明专利]一种肝癌起始细胞及其分离方法与应用无效
| 申请号： | 201210115441.7 | 申请日： | 2012-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN102653730A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 王红阳;杨文;于乐兴;唐亮 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 赵青 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肝癌 起始 细胞 及其 分离 方法 应用 | ||
1.一种从肝癌细胞系和人原代肝癌标本中获得肝癌起始细胞的分离方法，其特征在于它包括以下步骤：
(a)将OV6单克隆抗体与含有肝癌起始细胞的肝癌细胞系混合，形成“OV6单克隆抗体-肝癌起始细胞”复合物；
(b)离心去除未结合的OV6单克隆抗体，形成“OV6单克隆抗体-肝癌起始细胞”复合物沉淀，并与磁珠标记的抗小鼠IgG1第二抗体孵育，形成“OV6单克隆抗体-肝癌起始细胞-肝癌起始细胞”复合物；
(c)通过磁场分离步骤(b)形成的复合物，从而获得肝癌起始细胞。
2.根据权利要求1所述的一种从肝癌细胞系和人原代肝癌标本中获得肝癌起始细胞的分离方法，其特征在于，其中的肝癌细胞系是SMMC7721、Huh7、HepG2或HCC-LM3。
3.根据权利要求1所述的一种从肝癌细胞系和人原代肝癌标本中获得肝癌起始细胞的分离方法，其特征在于，它包括以下步骤：
(a)将OV6单克隆抗体与从原代肝癌标本中分离的肝癌细胞混合，形成“OV6单克隆抗体-肝癌起始细胞”复合物；
(b)离心去除未结合的OV6单克隆抗体，形成“OV6单克隆抗体-肝癌起始细胞”复合物沉淀，并与磁珠标记的抗小鼠IgG1第二抗体孵育，形成“OV6单克隆抗体-肝癌起始细胞-肝癌起始细胞”复合物；
(c)通过磁场分离步骤(b)形成的复合物，从而获得肝癌起始细胞。
4.根据权利要求1至3任一分离方法获得的肝癌起始细胞。
5.根据权利要求4所述的肝癌起始细胞，其特征在于，该肝癌起始细胞在体外具有更强的自我更新能力，在体内具有更强的成瘤能力，具有更强的迁移和侵袭、转移能力。
6.一种如权利要求4所述的肝癌起始细胞在制备肝癌预后诊断试剂或试剂盒中的应用。
7.一种如权利要求4所述的肝癌起始细胞在筛选抗肝癌药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的肝癌起始细胞在筛选抗肝癌药物中的应用，其特别征在于，其中的抗肝癌药物是肝癌起始细胞抑制剂，筛选方法包括以下步骤：
(a)将候选的肝癌起始细胞抑制剂加入肝癌起始细胞培养体系中，并检测肝癌起始细胞功能特性；
(b)将步骤(a)中测试组中肝癌起始细胞功能特性与对照组比较，如果测试组功能特性指标在统计学上低于对照组，则表明该候选物为抑制肝癌起始细胞的化合物。
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