[发明专利]一株植物乳杆菌及其高密度培养和冻干菌粉制备的方法

权利要求书

1.一株植物乳杆菌，其特征在于：所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum P8)是分离自内蒙古巴彦淖尔市乌拉特中旗传统发酵乳制品中的一株益生菌，具有人工胃液和人工消化液耐受性、胆盐耐受性、肠道凝集作用及抑制常见肠道致病菌等特性；该菌菌株已于2011年11月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心保藏，保藏号为CGMCC No.5468。

2.一种如权利要求1所述的植物乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于依次包括下述步骤：

a.菌种的活化：

将冷冻保存的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum P8)接种于MRS液体培养基中，37℃培养18～24小时，如此传代培养1～2次得到活化菌种；

b.培养基的配制：

将优化培养基各成份按比例配制，混合均匀后，然后调pH值为6.5，121℃下灭菌15min；

c.种子发酵液的制备：

取步骤a中活化好的菌种接种于b中配制的培养基中，37℃培养8～10小时；

d.接种与培养：

将步骤c的种子发酵液，接种于b中配制的培养基中，在控制的发酵条件下发酵8～15h；

e.终止发酵

当菌体产酸停止时终止发酵，得到植物乳杆菌的高密度发酵液。

3.一种如权利要求1所述的植物乳杆菌的冻干菌粉的制备方法，其特征在于依次包括以下步骤：

a.菌体浓缩：高密度发酵液经5000～12000g离心浓缩菌体；

b.添加保护剂：菌体浓缩液添加5～10倍的保护剂溶液；

c.干燥：将上述添加保护剂后的菌悬液经冷冻干燥得到冻干菌粉。

4.根据权利要求2所述的植物乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于b步骤和e步骤中优化培养基各成分的含量比例如下：

蔗糖50～80kg，酵母粉20～40kg，大豆蛋白胨8～20kg，柠檬酸1～1.5kg，柠檬酸钠20～25kg，MgSO₄.7H₂O 1.5～2.0kg，MnSO₄.5H₂O 0.08～0.12kg，吐温-80 0.8～1.0kg，蒸馏水1000L。

5.根据权利要求2所述的植物乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于d 步骤中控制的发酵条件为：35～37℃恒温培养，通过流加中和剂的方法控制发酵过程pH保持恒定，保持微通氧或厌氧发酵。

6.根据权利要求2所述的植物乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于e步骤中可根据pH不再降低，中和剂流加停止来判断是否到达发酵终点。

7.根据根据权利要求3所述的方法，其特征在于b步骤中保护剂的各成分的含量比例如下：脱脂乳30～35kg，脱盐乳清粉15～20kg，工业海藻糖15～20kg，维生素C 3～4kg，卵磷脂0.05～0.08kg，蒸馏水1000L。

8.根据权利要求5所述植物乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于中和剂可以选择NaOH、KOH、Na₂CO3等无机碱水溶液或氨水溶液。

9.根据权利要求5所述植物乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于pH保持微酸性，5.6-6.2之间。

10.根据权利要求5所述的植物乳杆菌的高密度培养方法，其特征在于微通氧条件通过通空气0.02～0.05vvm或每两个小时通空气一次的方法实现；厌氧条件通过通氮气0.02～0.05vvm或每两个小时通氮气一次的方法实现。