[发明专利]滇姜花中两种滇姜花素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取分离技术领域，涉及滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，特别涉及一种超临界CO₂萃取和制备液相色谱法结合制备两种滇姜花素的方法。

背景技术

滇姜花(H.yunnanense Gagnep．)为姜花属植物，具有镇痛、驱寒等药效。仅分布于云南。其中有效成分滇姜花素A、滇姜花素B和滇姜花素E等具有抗肿瘤活性，已引起人们的重视。

滇姜花素A，英文名：Yunnancoronarin A，CAS号：162762-93-8，分子式：C₂₀H₂₈O₂，分子量：300.4，无色油状物。

滇姜花素B，英文名：Yunnancoronarin B，CAS号：162762-94-9，分子式：C₂₀H₂₈O₃，分子量：316.44，无色针晶(乙醚)。

滇姜花素A和滇姜花素B均具有细胞毒活性，对KB细胞的IC50分别为7.60、2.04微克/毫升。

目前国内外对滇姜花研究较少，本发明提供一种滇姜花中特征性成分滇姜花素A和滇姜花素B的制备方法，为滇姜花的研究提供物质基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种超临界CO₂和制备液相色谱结合提取滇姜花中两种滇姜花素的方法。

滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，其特征在于它是经CO₂超临界流体萃取得二萜类化合物、氧化铝柱层析分离、再利用制备型液相纯化得两种滇姜花素产品。

所述的滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）CO₂超临界流体萃取

取滇姜花的根粉碎，置于萃取釜中，通入30-60%原料量的乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在30-60℃，压力为25-42MPa，CO₂流速为15-28kg/h，进行萃取60-150min；

（2）氧化铝柱层析分离

将步骤（2）中所得萃取物经氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷（2:1）、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；

（3）制备液相纯化

将上述粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱纯化，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A和滇姜花素B产品。

所述的制备液相的流动相为甲醇-水或乙腈-水溶剂系统，体积百分比为40-70%。

本发明的优点在于：本发明采用的工艺，萃取温度低，可避免成分热分解；具有制备量大、产品纯度高、简单易行等优点，可产业规模化。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行说明。

实施例1：

取1kg滇姜花的根，粉碎，置于萃取釜中，通入300ml乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在60℃，压力为25MPa，CO₂流速为15kg/h，进行萃取150min；将所得萃取物用甲醇分散，过氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷（2:1）、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；将上述粗品用甲醇溶解，配制成20mg/ml浓度的溶液注入制备型高效液相色谱纯化，以70%甲醇-水为溶剂系统，调节流速为20ml/min，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A280mg和滇姜花素B41mg，含量分别98.1%和98.4%。

实施例2：

取1kg滇姜花的根，粉碎，置于萃取釜中，通入600ml乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在30℃，压力为42MPa，CO₂流速为28kg/h，进行萃取60min；将所得萃取物用甲醇分散，过氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷（2:1）、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；将上述粗品用甲醇溶解，配制成20mg/ml浓度的溶液注入制备型高效液相色谱纯化，以40%乙腈-水为溶剂系统，调节流速为20ml/min，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A227mg和滇姜花素B42mg，含量分别为99.3%和97.8%。

实施例3：