[发明专利]多能性干细胞的非致瘤性增殖

说明书

技术领域

本发明关于人类多能性干细胞的增殖，尤其是关于人类胚胎干(hES)细胞的非致瘤性增殖。

背景技术

人类胚胎干(hES)细胞是多能性的，且其具有分化为成人大多数细胞种类的强大能力。因此，该细胞是再生医学的强大保证。该hES细胞令人向往的特殊性质包含不死性、多能性及无限制的未分化生长。传统上，在滋养层(feeder layer)细胞(如小鼠胚胎纤维母细胞(MEFs))上培养多能性胚胎干细胞，以将该细胞维持于未分化状态。该滋养层对于维持该等细胞是必要的；且通常在该滋养层上培养hES细胞直到需要分化时为止。不幸地，该小鼠滋养层维持细胞经常与hES细胞接触而受到污染，虽对于小鼠滋养层维持细胞不会造成多大功能上的影响，仍因此使小鼠滋养层细胞中培养的hES细胞不适用于临床。已有报告指出，无滋养层培养的人类多能性干(hPS)细胞会很快死亡，或者分化为定型细胞(committed cells)的异源性群体(heterogeneous population)。

许多报告已证实，尝试使用无细胞的成分或是至少避免非人类的成分或细胞，来取代该滋养层或维持细胞。该取代物无法展现长期保证的结果，且这样的尝试已证实不足以维持细胞稳固(robust)且继续增殖(propagation)。再者，该取代方式还展现，于无滋养层细胞的培养中，生长于培养基取代物中的hES细胞的确在hES细胞群落周围形成已分化细胞，这是没有实现最理想情况的标志。

因此，需要开发使用不造成污染及形成畸胎瘤(teratomas)的另一种滋养层细胞源来培养hES细胞的替代方案。

发明内容

一实施方式中，本发明提供一种人类多能性干细胞的增殖方法，共同培养人类多能性干细胞与脐带衍生干细胞。该脐带衍生干细胞于培养基中形成滋养层，用于增殖该人类多能性干细胞，且将该人类多能性干细胞维持于未分化状态。

一实施方式中，该人类多能性干细胞的增殖为非致瘤性增殖，使得该人类多能性干细胞不会形成畸胎瘤。

另一实施方式中，该人类脐带衍生干细胞对于CD10、CD13、CD29、CD44、CD73、CD90、CD166及HLA-ABC为阳性，但对于CD1q、CD3、CD34、CD45、CD56、CD117及HLA-DR为阴性。该人类脐带衍生干细胞具有成骨(osteogenic)或成脂(adipogenic)细胞分化能力。

另一实施方式中，该脐带衍生干细胞为人类脐带间质干细胞(HUCMSCs)，且衍生自人类脐带的华顿氏胶(Wharton’s jelly)。

另一实施方式中，该人类多能性干细胞对于碱性磷酸酶(AP)、Oct-4、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81、NANOG、SOX2、NF-200、短尾突变型(brachyury)、ATBF1或MAP2为阳性，且表达GDF9、GATA4、HAND1或TUJ-1基因。又，于该人类多能性干细胞中MYC被降低调控。

另一实施方式中，该人类多能性干细胞为人类胚胎干(hES)细胞，并形成类胚胎体(embryoid bodies)。

另一实施方式中，本发明提供一种用于增殖人类多能性干细胞的培养基，其中，该培养基包含在培养基中形成滋养层的脐带衍生干细胞。一实施方式中，培养基中的该脐带衍生干细胞为人类脐带间质干细胞(HUCMSCs)。

另一实施方式中，本发明提供一种用于增殖人类多能性干细胞的试剂盒，其中，该试剂盒包括包含脐带衍生干细胞的培养基，及其使用说明书。在一实施方式中，该试剂盒的培养基中的该脐带衍生干细胞为人类脐带间质干细胞(HUCMSCs)。

附图说明