[发明专利]桑肠杆菌及利用其生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法

权利要求书

1.一株桑肠杆菌Enterobacter mori，其特征在于：桑肠杆菌Enterobacter mori VL4-3，于2012年2月16日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M2012020，所述桑肠杆菌的菌株VL4-3的16SrRNA序列，其序列全长1414bp，与桑肠杆菌的相似度达到99.608％。

2.如权利要求1所述的一株桑肠杆菌CCTCC M2012020生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于所述的方法按以下步骤进行：

(1)菌种活化：取桑肠杆菌Enterobacter mori VL4-3CCTCC M2012020接种到斜面培养基上，在25～35℃、pH5～9条件下，静置培养24～72小时后得到活化菌种，置于4℃冰箱中；

所述斜面培养基：胡萝卜浸液200mL/L，蔗糖20g/L，琼脂13g/L；

(2)制备种子培养液：用步骤(1)所得的活化菌种，接种到种子培养基，在25～35℃条件下，100～150rpm/min振荡培养24h～72h，连续转接1～4次，制得种子培养液；

所述种子培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L；

(3)发酵：使用步骤(2)所得的种子培养液，按体积百分比2～20％的接种量接入发酵培养基，在30～40℃条件下，100～200rpm/min振荡培养1～3天；

所述发酵培养基：碳源5～20g/L，氮源1～3g/L，氯化钠0.5～1.5g/L，七水硫酸亚铁0.5～1.5g/L，调节pH 3～10；115℃条件下灭菌20分钟；

(4)转化：使用步骤(3)所得的发酵液，加入2～10g/L的阿魏酸，在30～40条件下，100～200rpm/min避光振荡培养5～12天后停止；

转化发酵液在7000rpm/min条件下，12min离心处理，收集上清液，得到淡黄色天然香兰素发酵液；所得到的天然香兰素发酵液浓度可达1.5～2.3g/L，转化率为18.25～28.87％。

3.根据权利要求2所述的一种用桑肠杆菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于步骤(3)中的所述碳源为淀粉、葡萄糖、蔗糖、D-果糖、麦芽糖、麦芽浸粉、麸皮、谷壳之中的一种或多种的混合。

4.根据权利要求2或3所述的一种用桑肠杆菌CCTCC M2012020生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于所述的碳源为麸皮。

5.根据权利要求2所述的一种用桑肠杆菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于步骤(3)中的所述发酵培养基的pH为8。

6.根据权利要求2所述的一种用桑肠杆菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于步骤(3)中的所述发酵培养基的氮源为豆粕、黄豆饼粉、牛肉膏、蛋白胨(Arg)、酵母粉、大豆蛋白胨、硝酸钾、硫酸铵、硝酸铵、磷酸铵之中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的一种用桑肠杆菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于步骤(3)中的所述发酵培养基的氮源为豆粕。

8.根据权利要求2所述的一种用桑肠杆菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于步骤(3)中的所述发酵温度为37℃。

9.根据权利要求2所述的一种用桑肠杆菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于步骤(3)中的所述发酵转速为100rpm/min。

10.根据权利要求2所述的一种用桑肠杆菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于步骤(4)转化中的所述接种量为10％，所述阿魏酸添加量为8.5g/L，所述阿魏酸添加时间为24h。