[发明专利]一种Rab23的shRNA及其慢病毒载体和应用

说明书

技术领域

本发明属于皮肤鳞癌防治技术领域，涉及一种Rab23的shRNA及其慢病毒载体和应用。

背景技术

Rab23是RAS原癌基因成员，其编码的蛋白是小GTP酶超家族Rab家族成员，其突变可引起小鼠开脑综合征(open brain syndrome)，因此又称为opb基因。2001年，Eggenschwiler等研究发现，Rab23是Sonic Hedgehog信号通路必要的负调控因子，而近几年，Rab23作为原癌基因的作用越来越被学者重视。研究发现，Rab23参与肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、和甲状腺癌的发生发展，并在胃癌中首次发现与肿瘤侵袭密切相关。

现有技术中，有学者直接将化学合成的siRNA片段转染哺乳动物细胞能特异性抑制细胞内同源基因的表达，但转染效率低、细胞内siRNA片段很容易被降解，因此这种方法不能实现稳定的RNA干扰。慢病毒载体在哺乳动物体内感染效率高、免疫原性低、且能感染分裂相和非分裂相细胞。由于病毒载体的这些特性，慢病毒介导RNA干扰能在各类哺乳动物细胞长期稳定表shRNA，抑制基因表达，具有高效、稳定、特异性强、适用范围广的特点，已成为RNA干扰技术的主要研究工具。RNA干扰技术在生物医药研究上的应用为临床肿瘤的应用基础研究增加了强有力的手段。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种Rab23的shRNA及其慢病毒载体和应用，该慢病毒载体的转染能够抑制鳞癌细胞中的Rab23基因的表达，抑制鳞癌细胞的侵袭。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种干扰Rab23基因的shRNA，该shRNA是针对Rab23基因的靶点序列形成的短发卡RNA，所述的靶点序列为：gcgacaaatt caagttaat。

所述的Rab23的shRNA，其中的一条链的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1或SEQ.ID.NO.2所示。

一种干扰Rab23基因的载体，该载体包含由SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2所示的序列构成的双链shRNA。

所述的干扰Rab23基因的载体，该载体为GV248-Rab23-shRNA，是在GV248载体中克隆入由SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2所示的序列构成的双链shRNA。

一种抑制鳞癌细胞的重组慢病毒，是由包装质粒Helper 1.0、Helper 2.0表达的蛋白包裹含有GV248-Rab23-shRNA载体的基因组；

该慢病毒是将GV248-Rab23-shRNA表达质粒与包装质粒Helper 1.0、Helper 2.0混合感染宿主细胞，经培养后裂解而产生。

针对Rab23基因靶点序列的干扰shRNA作为抗皮肤鳞癌药物的制备的应用。

所述的靶点序列为：gcgacaaatt caagttaat。

所述的干扰shRNA为由SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2所示的序列构成的短发卡RNA。

所述的干扰shRNA包装为慢病毒：由包装质粒Helper 1.0、Helper 2.0表达的蛋白包裹含有GV248-Rab23-shRNA载体的基因组。

所述的抗皮肤鳞癌药物为抗鳞癌细胞侵袭性的药物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明提供的干扰Rab23基因的shRNA及其抗皮肤鳞癌的应用是基于Rab23蛋白的表达与皮肤鳞癌的发展正相关，尤其是与鳞癌的侵袭能力相关，干扰Rab23蛋白的表达能够使鳞癌细胞的侵袭能力下降。所述的相关性表现为：

使用免疫组织化学的方法检测手术切除后人正常皮肤、皮肤鳞癌的癌前病变光线性角化病、原位鳞癌和侵袭性鳞癌组织中Rab23的表达差异，结果表明人正常皮肤中不表达Rab23蛋白，光线性角化病组织中Rab23蛋白低表达，原位鳞癌和侵袭性鳞癌组织中Rab23蛋白高表达，侵袭性鳞癌组织中Rab23蛋白表达量明显高于原位鳞癌组织。Rab23蛋白的表达与皮肤鳞癌的发展正相关提示Rab23基因或蛋白能够作为皮肤鳞癌防治的靶点。