[发明专利]一种异型双功能连接剂辅助蛋白质的PEG修饰方法

权利要求书

1.一种异型双功能连接剂辅助蛋白质的PEG修饰方法，主要步骤为：向待修饰的蛋白质溶液中加入异型双功能连接剂；反应完成后，加入羟胺去除巯基保护剂，使巯基暴露；离心除去未反应的异型双功能连接剂及其它副产物，随后加入PEG修饰剂，完成蛋白质的PEG修饰。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征：所述异型双功能连接剂一端的基团与蛋白质的氨基反应，实现与蛋白质的共价结合；与蛋白质共价结合后，它的另一端存在一个暴露的巯基。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是：所述异型双功能连接剂为N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯(N-Succinimidyl S-Acetylthioacetate，简称SATA)。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是由以下步骤组成：

步骤1，将待修饰的蛋白质按一定浓度溶于pH 7.0～8.0、20mM的磷酸钠缓冲液溶液中；

步骤2，蛋白质与异型双功能连接剂的摩尔比为1∶1～10，按此比例向样品溶液中加入异型双功能连接剂，于2～8℃下反应3小时以上；蛋白质与羟胺的摩尔比为1∶10～20，按此比例向样品溶液中加入羟胺，去除巯基保护剂，获得暴露的巯基，于2～8℃下反应1小时以上；

步骤3，用超滤管离心或用透析装置透析除去未反应的异型双功能连接剂及其它副产物，所使用的超滤管或透析装置的截留分子量由蛋白质的分子量确定；

步骤4，按蛋白质与PEG的摩尔比例为1∶2～40，向步骤3的样品溶液中加入PEG，于2～8℃下反应3小时以上，完成PEG和蛋白质的偶联。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所使用的聚乙二醇为单甲氧基马来酰亚胺聚乙二醇，分子量为2.0kDa-60.0kDa。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所使用的蛋白质为核糖核酸酶A(RNase A)。