[发明专利]抗人血清白蛋白单链抗体及其氮端连接多肽药物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种单链抗体，特别是涉及一种抗人血清白蛋白单链抗体及其氮端连接多肽药物的方法。 

背景技术

目前，以多肽为主的生物药物在世界范围内呈现出迅速推广的态势。 

多肽类生物药物药效显著，并能够治疗许多化合物类药品无法见效的遗传类疾病。但是，多肽类生物药物在使用中的最大问题之一是此类药物在人体内的衰减周期一般较短，致使用药频率相对较高。给病人带来较大的治疗成本和用药痛苦。因此，延长多肽类生物药物的半衰期就成为生物制药学领域亟待解决的课题。 

目前用于延长多肽类生物药物半衰期的方法主要有包括构建突变体、PEG修饰以及与大分子蛋白融合等。这些方法都能有效地延长多肽类生物药物的半衰期，但是也存在一些问题。通过突变体的构建通常可以降低多肽对水解酶的敏感性，有效地延长多肽类生物药物的半衰期，但是很多半衰期较长的突变体会改变药物的活性，要获得一个即能够满足半衰期要求，同时又不改变药物活性的突变体十分困难。因此，该技术不适宜在蛋白药物领域广泛推广应用，PEG化修饰可以在提高蛋白药物的稳定性的同时降低其免疫原性，但是有影响多肽类生物药物的生物活性的潜在可能，同时，对经过PEG化处理的多肽类生物药物进行纯化较为困难，增加了生产过程中的难度和生产成本。通过与具有较长半衰期的人体蛋白直接融合是一种切实可行的延长药物半衰期的有效方法，但是这种融合方式大大增加了多肽类生物药物的分子量，给生产和纯化带来了很多问题，分子量的增加也会改变药物的某些药代动力学特性，可能使其难以达到靶点所在位置，进而影响药效。 

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种可以有效延长半衰期的单链抗体以及使用该单链抗体组合形成的药物组合物。 

本发明的目的之一是提供一种特异性抗人血清白蛋白(HSA)单链抗体。 

本发明的目的之二是提供一种利用特异性抗人血清白蛋白(HSA)单链抗体与多肽类药物形成药物组合物的方法，以及利用这种方法延长药物半衰期的方法。 

在本发明的第一个目的中提供了一种单链抗体的VH链区域，它的互补决定区CDR具有选自下组CDR的氨基酸序列： 

CDR1: N-SEQ-05

CDR2: N-SEQ-06

CDR3: N-SEQ-07

所述的单链抗体VH链区域以N-SEQ-02所示的氨基酸序列为一个较佳的序列。

在本发明的第一个目的中，本发明还提供了一种单链抗体的VL链区域，它的互补决定区CDR具有选自下组CDR的氨基酸序列： 

CDR1: N-SEQ-08

CDR2: N-SEQ-09

CDR3: N-SEQ-010

所述的单链抗体VL链区域以N-SEQ-04所示的氨基酸序列为一个较佳的序列。

在本发明的第一个目的中，本发明还提供了一种单链抗体。其VL链区域具有如权利要求1所指明的互补识别区；其VL链区域具有如权利要求3所指明的互补识别区；其VH链以N-SEQ-02所示的氨基酸序列为一个较佳的序列。其VH链以N-SEQ-04所示的氨基酸序列为一个较佳的序列。其VH链区域和VL链区域使用如N-SEQ-01所示或N-SEQ-03所示的蛋白连接铰链连接。 

在本发明的第二个目的中提供了一种单链抗体与多肽药物连接形成组合物的连接方法。它使用如N-SEQ-01所示或如N-SEQ-03所示的蛋白连接铰链从单链抗体的氮端与多肽类药物连接。 

在本发明的第二个目的中，本发明还提供了一种通过上述单链抗体有效延长生物药物半衰期的方法。它采用本发明所述的单链抗体的氮端和药物形成组合物。它含有上述与单链抗体的氨基酸序列和任意一种多肽类药物的序列。 

与现有技术相比本发明的有益效果为：本发明中的单链抗体它具有分子量小，抗体特异性强，免疫源性弱，水溶性好，易于通过发酵方式大规模生产，产物均一性强等特点，单链抗体非常适合与多肽类生物药物融合，通过菌类发酵整体表达过程大批量生产，人血清白蛋白分子量为150Kda，在人体中的半衰期长达19天，借助其与人源化抗人血清白蛋白单链抗体片段所形成的组合物，可有效延长多肽类生物药物的半衰期，同时，由于单链抗体分子量很小，融合表达后的抗体-多肽类生物药物组合体本身的分子量依然可保持在小于20Kda较低水平。避免了潜在的免疫源性，也降低了生产过程中的难度和生产成本。 

附图说明

图1是电泳检测结果示意图；