[发明专利]一种鸡新城疫株病毒及其分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物病毒学领域，具体提供了一种新的鸡新城疫病毒，并且提供了该病毒的分离方法及其应用。

背景技术

鸡新城疫(NewCastledisease)，由副粘病毒引起的高度接触性传染病。又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。常呈急性败血鸡新城疫鸡新城疫症状。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。死亡率高，对养鸡业为害严重。有强毒株和弱毒株两类。病毒分为低毒力型(即缓发型)、中等毒力型(即中发型)、强毒力型(即速发型)3型，现在普遍采用疫苗接种的形式来预防该类传染病，目前，我国最常用的疫苗有鸡新城疫I、II、L(Lasota)系活疫苗和油乳灭活疫苗，可以防治一般性的新城疫病毒感染，但是由于病毒的多样性，往往新变异病毒的出现会导致疫情的大面积发生，给禽类养殖带来沉重的打击。

山东某父母代肉种鸡场：发病周龄为31周，正处于产蛋高峰期，产蛋率为80％左右，临床上突然出现轻微的呼吸道症状，首先在一栋鸡舍发生产蛋下降，8天后产蛋率从80％下降到24％，采食时间明显延长，10-14天后产蛋开始缓慢回升。此后，相邻的几栋鸡舍相继发病。剖检可见喉头粘液增多，喉头、气管出血严重，心、肝、脾、肺正常；个别肾肿；卵巢以及卵泡病变不明显；肠道有点状出血。取发病前后的鸡血清进行抗体检测，同时取发病鸡的脑、输卵管和气管进行病原分离。未发病前：ND的平均抗体水平为2^8.5，高低相差5；发病初期H₉的平均抗体水平为2^8.7，高低相差4；发病10天后：发病栏ND抗体飙升至2¹²以上，发病栏中的6个抽检样品中：2个2¹⁵，2个2¹⁷，1个2¹⁸，1个2¹³。而在整个发病前后，该鸡群的H₉抗体水平无明显变化，据此可断定：该鸡场为NDV强毒感染；同时自2001年3月底至5月份，该公司不同种鸡场(相隔20公里以上)饲养的三批种鸡均连续在产蛋高峰期发病，症状一致类似的病例在天津、北京、河南、江苏、河北、山东省不同地区如东营、济宁、临沂、德州、济南、枣庄等发生。

可见该致病性毒株与传统的疫苗毒株(La Sota株及Clone30株)在基因分型及抗原性上均产生了较大的差异，使得传统疫苗株已不能产生有效的保护，为了能够更好的认知该毒株及其致病性，必须对其进行进一步的分离及研究。

发明内容

本发明的发明人从上述的发病鸡群中分离到一株病毒，代号为SDM01株并提供了其分离制备方法，发明人对该毒株进行了生物保藏，保藏编号CCTCC NO：V201109；通过SPF鸡胚传代，进行了生物学特性试验如血凝性、血清中和试验、动物回归试验和外源病毒检查，试验结果证实该病毒为新城疫病毒。通过鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定、6周龄鸡静脉内接种致病指数(IVPI)测定，证实该新城疫病毒为强毒力毒株。通过对分离毒株及标准毒株制备阳性血清，进行HI交叉中和试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验、F和HN基因序列测序比较及免疫攻毒保护试验，结果证实新城疫SDM01株与传统的疫苗毒株(La Sota株及Clone30株)在基因分型及抗原性上均产生了较大的差异，SDM01株对目前流行株具有较好的保护效果，是较佳的候选疫苗毒株。

发明人对该病毒毒株进行了生物保藏，于2011年3月保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：V201109。

在本发明中，发明人对该病毒毒株进行了进一步的研究，发现其具有如下的特征：

(1)发病鸡除呼吸道症状外，大部分鸡均有腺胃出血、十二指肠出血、泄殖腔出血、气管出血或粘液增多等病变，用10日龄SPF鸡胚接种病毒，可见24-72小时死亡的鸡胚均有充血或出血，肝脏有坏死和出血点；

(2)病毒分离物对1％鸡红细胞产生凝集；

(3)SPF鸡回归试验可出现呼吸道症状、腺胃出血、肠道枣核样出血、盲肠扁桃体出血及泄殖腔出血等新城疫典型病变；

(4)外源病毒检查发现，病毒分离物免疫SPF鸡的血清只呈现ND抗体呈阳性反应，而其它鸡十八种疾病均为抗体阴性反应；