[发明专利]一株通过发酵甘草提高甘草次酸含量的内生真菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株内生真菌。

背景技术

甘草为豆科(Leguminosae)甘草属(Glycyrrhiza Linn)属乌拉尔甘草(G.uralensis Fisch)， 胀果甘草(G.inflate Bat)和光果甘草(G.glabra L)的干燥根和根茎，广泛分布于我国东北、西 北及华北等地。甘草性味甘平，为补气类中药，具有补中益气、清热解毒、润肺止咳、缓 急止痛、调和药性等功效。中医处方离不开甘草，自古至今，广为药用，兼有“国老”的 尊号。近年来，野生甘草因过度采挖强度而濒临灭绝，甘草已被列入《野生药材资源保护 条例》的国家二级保护植物。

甘草的主要成分为甘草次酸，具有防癌、抑癌的作用，是医药、化妆品、食品的生产 原料。甘草次酸的来源主要有两个途径：一是化学合成，二是从甘草中提取。上述两种途 径均需要利用甘草资源，因此如何高效利用甘草资源是人们的研究热点。

发明内容

本发明提供了一株通过发酵甘草提高甘草次酸含量的内生真菌。

本发明通过发酵甘草提高甘草次酸含量的内生真菌，它为产黄青霉(Penicillium  chrysogenum)RE11，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2012047，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日；它在PDA固体培 养基上培养7d后，菌落直径为6～8cm，菌落为绿色，基质为黄色，菌丝较密集，菌落边 缘整齐，紧贴培养基，产分生孢子，分生孢子头呈圆柱状，分生孢子单生，单细胞。

本发明通过发酵甘草提高甘草次酸含量的内生真菌，它为产黄青霉(Penicillium  chrysogenum)RE11，其ITS序列提交至NCBI网页，通过Blast搜索与所得到的序列相似 性高的序列，并通过MEGA5.03软件构建系统进化树，RE11菌株的ITS序列与青霉属菌 (Penicillium chrysogenum，编号GQ161752.1)菌株的相似性都达到了99％以上，结合形态学 观察结果，确定内生真菌RE11为产黄青霉(Penicillium chrysogenum)。

本发明通过发酵甘草提高甘草次酸含量的内生真菌，它为产黄青霉(Penicillium  chrysogenum)RE11，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2012047，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日。

本发明利用微生物制药手段提取分离甘草健康植株的内生真菌RE11，以其发酵甘草， 以HPLC法为分析手段测定经甘草内生真菌RE11发酵甘草后甘草次酸的含量，结果甘草 发酵后甘草次酸含量显著高于生药。将获得的内生真菌RE11菌株通过形态学观察和18S rDNA序列分析鉴定其种属。

本发明通过发酵甘草提高甘草次酸含量的内生真菌，它为产黄青霉(Penicillium  chrysogenum)RE11，能够以甘草为底物对其进行发酵可使甘草中的甘草次酸含量显著升 高；甘草次酸是经典的抗炎药物目前在医药化妆品等领域中广泛应用，还具有防癌和抗癌 作用；本发明对采用甘草内生真菌RE11发酵甘草生产甘草次酸具有指导意义。

附图说明

图1为具体实施方式一中产黄青霉(Penicillium chrysogenum)RE11的孢子显微结构 图；

图2为具体实施方式一中产黄青霉(Penicillium chrysogenum)RE11的PCR扩增的 电泳图，其中M泳道表示Marker，1泳道表示RE11；

图3为具体实施方式一中产黄青霉(Penicillium chrysogenum)RE11的系统进化树 图；

图4为具体实施方式一中甘草次酸对照品的HPLC色谱图，其中1表示甘草次酸；

图5为具体实施方式一中甘草的HPLC色谱图，其中1表示甘草次酸；

图6为具体实施方式一中甘草加入对照品后甘草次酸的HPLC色谱图，其中1表示 加对照品后甘草次酸；

图7为具体实施方式一中RE11发酵甘草后甘草次酸的HPLC色谱图，其中1表示 甘草次酸。

具体实施方式