[发明专利]山茱萸总苷的提取方法及其在制备耐缺氧药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于本发明属于含有原料或其与不明结构之反应产物的医用配制品技术领域，具体涉及到来源于植物的材料。

背景技术

山茱萸为山茱萸科、山茱萸属落叶小乔木山茱萸的干燥成熟果肉。又名山萸肉、枣皮等，味酸涩，性微温，有温补肝肾，固涩精气之功，主治腰膝疼痛、眩晕、耳鸣、小便频数、漏下不止等症，是临床常用中药之一。

山茱萸主要化学成分主要为多糖、有机酸及酯类、环烯醚萜苷及苷元、鞣质以及挥发性成分。其中环烯醚萜苷是山茱萸中的主要活性部位。目前已明确的环烯醚萜苷类成分包括莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷、山茱萸苷、7-O-乙基莫诺苷、7-氧-丁基莫诺苷、7-脱氢马钱苷、马钱苷酸等。其中莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷含量最高，三者在山茱萸中的含量分别达到2.0％、0.6％和0.1％，占到了山茱萸总环烯醚萜苷的85％以上。

山茱萸总苷具有广泛的生物活性：包括保护神经，影响脑内多种细胞因子，抑制各种模型导致的神经细胞凋亡及神经元死亡，从而发挥对脑梗死和阿尔茨海默症的治疗作用。作用于心脑血管系统，抑制体内外血栓形成，激活抗凝因子，拮抗多种方法诱导的血小板聚集增高，对冠脉结扎后的心肌缺血起到保护作用。治疗糖尿病，对糖尿病血管并发症、心脏并发症和肾脏并发症均有缓解作用，保护糖尿病引起的心脏、肾脏及血管组织细胞的损伤。

酶解法在天然产物有效成分的提取中运用日益广泛。酶的催化反应具有专一性、高效性、条件温和等特点，生物酶解提取是通过酶的水解或降解细胞壁结构，使细胞内的成分充分溶解于溶剂中，从而增大提取率。近年来的许多成功实例，表明酶法提取条件温和，提取物显色稳定性及重复性均较好，提取率高于传统工艺。但尚未有采用此方法辅助山茱萸总苷提取的报道。

缺氧是高原、航空、潜水等特殊环境最普遍的应激因素，急性暴露于缺氧环境的人或动物将产生缺氧应激反应。要提高机体的耐缺氧能力，就要通过降低机体缺氧应激强度，促进耐缺氧适应的建立，减弱缺氧对机体的损伤，使机体在缺氧环境中维持较正常的生理机能。山茱萸补益肝肾，涩精固脱。临床中对眩晕耳鸣，腰膝酸痛，大汗虚脱，遗精遗尿等虚症有显著疗效。迄今为止，尚未见山茱萸总苷用于防治心脑缺氧的报道。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题在于提供山茱萸总苷的制备方法。

本发明所要解决的另一个技术问题在于为山茱萸总苷提供一种新用途。

解决上述技术问题所采用的技术方案是由下述步骤组成：

1、烫煮

将山茱萸新鲜果实投入沸水中至浸没，沸水煮10～15分钟，捞出后冷却片刻，用手挤压出果核，果肉40℃烘干，粉碎，过20目筛，得山茱萸药材粉末。

2、酶解提取

取山茱萸药材粉末，加2～4倍水溶胀，再加入苦杏仁酶，山茱萸药材粉末与苦杏仁酶的质量比为1∶0.005～0.015，用冰乙酸调节pH值至4～4.5，恒温40～50℃酶解3～5小时，加与水等质量的乙醇，终止酶解，再加水至乙醇质量分数为25％～27％，用频率为25kHz、功率为300W的超声波提取30～40分钟，倾出上清液；山茱萸药材粉末渣再以液料比为12～16倍、质量分数为25％～27％的乙醇水溶液提取一次，减压抽滤，合并两次提取液，减压浓缩至相对密度为1.20的浸膏，得山茱萸乙醇提取物。

3、纯化

山茱萸乙醇提取物以等质量的水稀释并混匀，通过大孔树脂柱进行纯化，用去离子水洗脱，至洗脱液无色，再以质量分数为48％～55％乙醇水溶液洗脱，洗脱体积8～9倍柱体积，上样量40～50mg/g，合并洗脱液，减压浓缩至无醇味，在烘箱中50℃干燥，粉碎，过20目筛，得山茱萸总苷，在山茱萸总苷中，莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷总含量不低于70％。

在本发明的酶解提取步骤2中，取山茱萸药材粉末，加2～4倍水溶胀，再加入苦杏仁酶，山茱萸药材粉末与苦杏仁酶的质量比为1∶0.01，用冰乙酸调节pH值至4.5，恒温50℃酶解4小时，加与水等质量的乙醇，终止酶解，再加水至乙醇质量分数为25％～27％，用频率为25kHz、功率为300W的超声波提取30～40分钟，倾出上清液；山茱萸药材粉末渣再以液料比为8～10倍、质量分数为25％～27％的乙醇水溶液提取一次，减压抽滤，合并两次提取液，减压浓缩至相对密度为1.20的浸膏，得山茱萸乙醇提取物。

有效成分山茱萸总苷在制备耐缺氧药物中的用途。