[发明专利]喉癌易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种喉癌易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估喉癌发病的风险级别，并作为预防和治疗喉癌的方向指导。

背景技术

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤，约占全身癌肿的1.2%-1.6%，每年的死亡率为4-10人/万人。流行病学调查表明，喉癌死亡率以中国为最高，尤其是我国南方，它是严重威胁我国人民生命健康的肿瘤之一。

研究表明，喉癌的发生、发展及临床预后与环境因素有密切关系，如吸烟、汽车尾气等。但在临床工作中发现，在同样的环境暴露条件下许多人终生不患癌，即使患了喉癌经治疗后也无肿瘤复发，而分期、分级相同的患者也可表现出截然不同的预后。其原因与遗传有关，如代谢酶基因失活与癌基因激活而致癌。

众多研究表明，环境中致癌因素诱导抑癌基因失活与癌基因激活而致癌。已知大多数化学致癌物原型并不具有致癌活性，必须经过代谢酶代谢活化后才能与生物大分子作用而致癌。已知绝大多数化学致癌物原型并不具有致癌活性，必须经过代谢酶代谢活化后才能与生物大分子作用而致癌。外源性物质在体内代谢过程中需要有I相代谢酶，主要是细胞色素P450（CYP1A1），这种酶对解毒多环芳烃类致癌物有很强的特异性，因此多环芳烃类致癌物能否引起靶细胞癌变，很大程度上取决于CYP1A1以及CYP2D6基因编码的酶活性。研究表明，CYP1A1基因上Ile462Val位点及MspI位点多态性、CYP2D6基因上C188T位点多态性都与其编码的酶活性密切相关。

人类X射线交错互补修复基因1（XRCC1）在碱基切除修复系统中起着整体作用，是编码碱基损伤修复联合序列的一种重要的蛋白。研究表明，XRCC基因上Arg399Gln AG/GG多态性会导致DNA错配修复能力下降，使DNA的稳定性降低，增加喉癌的发病风险。

综上所述，鉴于CYP1A1基因、CYP2D6基因、XRCC1基因在喉癌变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者在喉癌发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患喉癌的高危人群，从而有针对性的预防和治疗喉癌，这对于降低喉癌的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于本发明提供了一种检测喉癌易感基因无创检测试剂盒。该试剂盒包括检测CYP1A1基因上Ile462Val位点及MspI位点多态性，CYP2D6基因上C188T位点多态性，XRCC1基因上Arg399Gln位点的4个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估喉癌发病的危险因子的基础上，本发明提供一种喉癌易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测本发明提供了一种检测喉癌易感基因无创检测试剂盒。该试剂盒包括检测CYP1A1基因上Ile462Val位点及MspI位点多态性，CYP2D6基因上C188T位点多态性，XRCC1基因上Arg399Gln位点的4个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液 2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对（每条引物各0.25ul）；ddH2O 19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶 0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O 3.875ul。

测序反应体系：25%BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mM EDTA溶液1ul；100%乙醇溶液 15ul；70%乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O 2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

 

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。