[发明专利]钙磷代谢调节能力基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

 本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种钙磷代谢调节能力的基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估钙磷代谢调节能力相关疾病的风险级别，并且指导人群提早预防和治疗。

背景技术

钙和磷是人体内含量最丰富的无机元素。其中99%的钙和86%的磷以羟磷灰石的形式存在于骨和牙齿当中，其余分布于体液和软组织中，以溶解状态存在。钙和磷的代谢在许多方面是相互联系的，机体从食物中摄取钙和磷，又把它们从尿和粪中排泄，成人每日摄取和排泄量大致相等，处于动态平衡之中。血钙和血磷分别指血浆中所含的钙和磷。血钙和血磷含量的相对稳定依赖于钙、磷的吸收与排泄、钙化及脱钙间的相对平衡，而这些平衡又主要受维生素D3、甲状旁腺素和降钙素等激素的调节。维生素D3功能的实现需要通过与活化的细胞核内受体，即维生素D受体（VDR）相结合。VDR编码的蛋白与维生素D结合，使人体重要的钙调节激素骨化三醇发挥生物活性，促进肠道对钙的吸收，并且调节骨的无机盐代谢。

众多研究发现，钙磷代谢调节能力具有较高的遗传倾向，通过分子诊断检测与钙磷代谢调节能力密切相关的基因位点就可以提前评估受检者钙磷代调节能力的遗传风险，提早预防和治疗。当携带风险基因型时，VDR基因编码的蛋白的活性降低，且数量也减少，减少机体对磷钙的吸收利用，钙磷代谢调节能力降低。2006年黄振武等对青年女性膳食钙的吸收与VDR基因Fok I酶切多态性间关系进行了探讨，进一步佐证了人类(儿童) VDR基因Fok I酶切多态性与机体膳食钙的吸收存在一定的关联。Morrison NA等观察了VDR等位基因多态性与血清骨钙素的关系，结果发现，限制性内切酶BsmI 和Apa I等酶切VDR基因产生的不同基因型，可以预测血清骨钙素水平，因此认为，VDR基因的多态性可以预测骨转换。

由于VDR基因型的多态性与骨密度(bone mineral density，BMD)之间存在一定的相关性，而且影响青少年骨量的形成，因此可将ＶＤＲ基因型作为遗传标志物，预测成年后的骨量，对骨量形成不利的基因型可采取一定的干预措施，以便成年后达到较高骨质峰值。 　　有关研究表明，VDR基因变异与骨质疏松、骨质疏松性骨折、骨性关节炎、乳腺癌、前列腺癌、甲状旁腺激素分泌亢进、糖尿病和冠心病等也有相关性。识别不同基因型，对不同个体要有针对性地进行补钙，也可根据不同基因型采取相应的干预措施达到预防和延缓某些疾病发生的目的。

因此，建立简单、快速的钙磷代谢调节能力易感基因无创检测方法，能够检测出钙磷疾病发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患相关疾病的高危人群，有针对性的进行指导，对于降低疾病发生、特别是保障青少年和妇女群体的安全健康具有非常重要的意义。

发明内容

基于VDR基因上BsmI(rs1544410)、FokI(rs10735810)和ApaI(rs7975232-731236)的3个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估钙磷调节能力疾病的风险级别，本发明提供一种钙磷代谢调节能力基因无创检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测VDR基因上BsmI(rs1544410)、FokI(rs10735810)和ApaI(rs7975232-731236)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液 2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对（每条引物各0.25ul）；ddH2O 19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶 0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O 3.875ul。

测序反应体系：25%BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mM EDTA溶液1ul；100%乙醇溶液 15ul；70%乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O 2ul。

本试剂盒供一人份检测使用，试剂盒的保存温度为-20℃。

 

具体实施方式