[发明专利]1,4—丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法

说明书

 

技术领域：

本发明与1,4—丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法有关，尤其与制备质量稳定，色泽低的1,4—丁二磺酸腺苷蛋氨酸的方法有关。

背景技术：

1,4—丁二磺酸腺苷蛋氨酸（S—Adenosyl—L—methionnine 1，4—butanedisulfonate）是S—腺苷蛋氨酸（S—adenosyl—L—methionine，SAM，SAMe）的1，4—丁二磺酸盐，在临床上用于治疗抑郁症、关节炎、肝功能紊乱等疾患，适用于肝硬化前和肝硬化所致肝内胆汁淤积 ；适用于妊娠期肝内胆汁淤积。

其化学名称：（+）—5^，—[（R*）—[（R*）—3—氨基—3—羧丙基)甲磺基]—5^，—脱氧腺苷，1,4—丁烷二磺酸盐。它的分子结构如下：

文献报道的腺苷蛋氨酸制备工艺大致分为以下三种：1）化学合成法：以S—腺苷同型半胱氨酸和甲基供体（CH3I）合成腺苷蛋氨酸。由于产率较低，且产物的立体构型无选择性，很少使用。2）酶促转化法：利用腺苷蛋氨酸合成酶（腺苷转移酶）催化底物L—蛋氨酸和ATP生成腺苷蛋氨酸。3）微生物发酵法：利用某些微生物（尤其是酵母菌的一些菌株）在含有一定量L—蛋氨酸的培养基中生长时，在细胞内能够积累较高浓度的腺苷蛋氨酸的特点，通过发酵制备腺苷蛋氨酸。基于成本考虑，目前主要采用发酵法生产腺苷蛋氨酸，方法基本实现工业化，本产品的难点在于分离纯化获得质量稳定，色泽低的1,4—丁二磺酸腺苷蛋氨酸。

中国专利CN200510019206.x，美国专利USP4，990，606、USP5，128，249和欧洲专利EP0，162，323均阐明了SAM的分离纯化及成盐（包括1,4—丁二磺酸盐）工艺。这些专利的基本路线为：含有腺苷蛋氨酸（SAM)的物料通过有机溶剂和酸溶液处理得到含SAM的滤液，经过超滤膜过滤，过离子交换柱，以醋酸洗涤，接着以1,4—丁二磺酸溶液洗脱，吸附树脂纯化，反渗透膜浓缩、喷雾干燥或溶媒结晶等一系列过程，最终得到腺苷蛋氨酸不同形式的盐。其中美国专利USP4，990，606、USP5，128，249和欧洲专利EP0，162，323得到的产品中1,4—丁二磺酸与腺苷蛋氨酸之比为1.5:1，该产品中酸的强度不够，影响产品的稳定性。这些专利将超滤膜过滤置于提取之前，由于发酵滤液含有大量大分子蛋白及细胞碎片，不利于超滤；同时，在进行产品精制之前，还要进行离子交换，脱色等工序，会在产品中带入热源等物质，太早进行超滤意义不大。根据这些专利描述的方法得到的产品质量不稳定，异构体比例以及有关物质达不到药品质量要求，或者色泽偏黄。

发明内容：

本发明的目的是提供一种工艺流程合理，分离过程简单，产品质量稳定，色泽浅的1，4—丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法。

本发明是这样实现的：

本发明1,4—丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，包括：

（1）用酿酒酵母在发酵罐中通气发酵24—72小时，发酵过程中补加L—蛋氨酸，将发酵液直接用于后续步骤或者将发酵液离心过滤得含腺苷蛋氨酸的菌体使用，或者经酶促转化法得含腺苷蛋氨酸的混合液，

（2）用0.3-—0.6倍菌体体积的V/V浓度40—60%EA水溶液与菌体搅拌混合25—50分钟，或者用1—1.5倍发酵液体积的V/V浓度为1.5—2.5硫酸与发酵液或混合液搅拌混合2.5—3.5小时，将搅拌混合液用离心机过滤，在滤液中加入V/W浓度10—20%碳酸盐进行中和，到pH4.0—5.0时，将中和液离心过滤，得上清液，

（3）将上清液过H⁺型离子交换柱，pH4.0—5.0，流量0.3—0.6倍柱体积，用浓度为0.1—0.2mol/L的醋酸洗涤至液出液小于或等于pH3.0，再用纯化水洗涤至流出液pH4.0—5.0，用浓度为0.1—0.2mol/L的1,4—丁二磺酸洗脱腺苷蛋氨酸，流速0.3—0.6体积/小时，pH＜3.5开始收集洗脱液，

（4）将洗脱液过吸附树脂柱，流量0.3—0.6倍柱体积/小时，上柱完毕后，用浓度为10—20mol/L的1,4—丁二磺酸顶洗1.0—2.0柱体积，当pH＜4.0后，收集流出液，

（5）将流出液经超滤膜过滤后再经反渗透膜浓缩，或者将流出液经反渗透膜浓缩后再经超滤膜过滤，得浓缩液，温度为0—30℃，

（6）通过向浓缩液中加入1,4—丁二磺酸，调节1,4—丁二磺酸与腺苷蛋氨酸之比为1.63—1.66∶1，