[发明专利]一株新型EV71病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型EV71病毒及其应用。

背景技术

流行病学

手足口病是一种全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道，最早于1957年由新西兰的Seddon加以描述。1974年Schmidt首次从一个脑患儿(1969年)的粪便样品本中分离鉴定到EV71，其后3年中，在加利福尼亚23例重症神经系统患者中再次分离到该病毒。而且随后该病变化谱越来越广，症状从发热、手足口病、疱疹、无菌性脑膜炎、麻痹、脑炎，甚至死亡。

1975年，保加利亚超过750人发病，其中44人死亡。

1978年，日本出现大规模的流行，共发现病例36，301例，除少数无菌性脑膜炎外，主要表现为HFMD。

1997年后，亚太地区发生数次EV71引起的大流行和地域性流行，1997年马来西亚发生了主要由EV71引起的手足口病流行，1998年在日本、马来半岛和新加坡分别报道了EV71引起的手足口病暴发疫情。1998年我过台湾发生迄今最大的HFMD流行，总共报告129，106例HFMD或疱疹性烟峡炎病例。后来在澳大利亚、新加坡、越南、马来西亚均有大规模HFMD暴发的报告。

我国大陆地区1981年在上海首次发现手足口病，自1999年以来，我国广东、福建、上海、重庆等地报告了EV71是HFMD的的主要病原之一。2000年以后我国每年都有大规模的EV71手足口病的报道，2008年在安徽阜阳大规模暴发，当年共报道手足口病病例17.6万例，主要病原为EV71。2010年和2011年，中国CDC发布的报告，手足口病的暴发1,619,706例和1,774,669例，死亡人数分别为509例和905例。

人类是EV71病毒唯一的自然宿主，主要的传染源为EV71患者、健康携带者和隐形感染者，由于EV71的传染性强，传播途径复杂，病原在自然条件下的存活时间较长，流行强度大，传播快，在短时间内可造成大面积流行，其社会危害相当严重。

病原学

肠道病毒71型(EV71)属于小RNA病毒科(Picornaradae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员，归属于人类肠道病毒A。引起HFMD和中枢神经系统疾病，为危害程度仅次于脊髓灰质炎病毒的嗜神经性肠道病毒。该病毒的颗粒为二十面体立体对称的球形结构，无包膜和突出，直径约24～30nm，核酸为单股正链RNA。如同其他肠道病毒属成员一样，EV71型病毒基因组编码的分子量分别为34KD、30KD、26KD和7KD的多肽VP1(α)、VP2(β)、VP3(γ)、VP4(δ)，构成原聚体，后者再拼装成具有五聚体样结构的亚单位，60个亚单位通过各自的结构域相互连接，最终形成病毒的外壳。EV71病毒由于没有类脂膜，所以它对乙醚、脱氧胆酸盐、去污剂以及弱酸有抵抗性。此外，该病毒还能抵抗70％乙醇和5％甲酚皂溶液等常见的消毒剂，但是高温(56℃，30min)处理和紫外线照射可以很快将病毒灭活，它对各种氧化剂如高锰酸钾、双氧水、漂白粉等也很敏感。

EV71病毒的基因组为含有大约7411个核苷酸(7423/MS/87株)的单股正链RNA，腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富(A+U＝52.8)。RNA中仅有一个开放阅读框(ORF)，编码含2194个氨基酸的多聚蛋白，在其两侧为5′和3′非编码区(UTRs)，它与其他肠道RNA病毒一样，在3′末端有多聚腺苷酸(poly A)尾，而其5′末端共价结合有一个小分子量的蛋白(VPg)。

EV71的疫苗研究进展

目前公开发表的EV71候选疫苗种类包括全病毒灭活疫苗、减毒活疫苗、病毒样颗粒(VLPs)、合成多肽疫苗、DNA和病毒及细菌载体疫苗等。全病毒灭活疫苗由于可借鉴脊髓灰质炎、甲型肝炎疫苗等肠道病毒疫苗的经验，工艺较为成熟，成为目前优先开发的疫苗类型，而其他类型的疫苗在全世界仍处于科学阶段，未见研发成功的报道和产品。

EV71疫苗多选择全病毒灭活疫苗工艺，采用的细胞基质为非洲绿猴肾(Vero)传代细胞或人二倍体细胞，采用生物反应器、细胞工厂或转瓶工艺生产。目前我国大陆地区已有3家企业建立中试的生产工艺和质量标准，完成疫苗临床试验前研究资料，进入临床试验审批阶段，有1～2家已进入III期临床试验阶段。

动物模型的研究