[发明专利]富集精细胞群的方法

说明书

本申请是申请日为2005年7月22日、发明名称为“富集精细胞群的方法”的中国专利申请200580030309.4(国际申请号PCT/US2005/026269)的分案申请。

技术领域

本发明一般涉及富集精细胞群。具体而言，本发明一般涉及不物理分选细胞而对活精细胞群的富集。

发明背景

通过人工授精(AI)使动物受精以及体外受精后的胚胎移植已经是一项成熟的操作。在家畜产业中，能够对繁殖结果施加影响而使其后代具有一种或多种期望特征有明显的优势。例如，乳制品产业中如能预先选择后代有利于雌性以保证奶牛的产量，则会带来经济效益。将精子分离为富集的带有X和Y染色体的细胞群，即称作的性别富集精子或性别富集精液，便是实现预选后代的方法之一。

Johnson等人(美国专利号5,135,759)描述了使用流式细胞仪/细胞分选仪根据DNA内容物将带有完整X和Y染色体的精子群分离为带有X和Y染色体精子富集的细胞群。如所述，将精子与DNA选择性标记物在30℃到39℃的温度下混合1小时(39℃)到1.5小时(30℃)。接着使用流式细胞仪测量当精子通过激光束时发出的荧光量。由于带有X染色体的精子比带有Y染色体的精子含有更多的DNA(由物种决定约为3％到5％)，带有X染色体的精子比带有Y染色体的精子产生更大的荧光光强。使含有预定荧光强度的单个精子的液滴带上电荷并使其静电偏离至收集容器中。接着将收集的性别富集的精子群用于显微注射或人工授精。显然，这一方法需要物理分选精细胞以获得性别富集的精子群。根据J0hnson的物理分选是费时且高成本的。

发明概述

本发明的多方面之一是关于一种特征富集的精子分散体(有时称为悬浮液)的制备方法。在一个实施方案中，例如，将本发明的方法用于制备关于X或Y染色体精子富集的精子分散体。

简言之，因此，本发明涉及选择性降低精细胞分散体中精细胞的亚群使卵受精的能力。该方法包括在液体中形成标记的精细胞的分散体，所述液体包含诱导精子不运动性的化学剂或具有诱导精子不运动性的温度，其中与精细胞结合的标记的存在、缺少或数量指示分散体中精细胞亚群的遗传、蛋白质组学、结构或功能特征。该方法还包括光学检测分散体以鉴定作为亚群成员的个体精细胞；确定分散体中亚群成员的位置；和向分散体内不同位置递送能量剂量以选择性降低亚群成员使卵受精的能力而不类似地影响在分散体中其它位置的精细胞。

本发明还涉及使用富集的精细胞群授精雌性哺乳动物的方法。该方法包括在液体中形成标记的精细胞的分散体，所述液体包含诱导精子不运动性的化学剂或具有诱导精子不运动性的温度，其中与精细胞结合的标记的存在、缺少或数量指示分散体中精细胞亚群的遗传、蛋白质组学、结构或功能的特征。该方法还包括光学检测分散体以鉴定作为亚群成员的个体精细胞；确定分散体中亚群成员的位置；向分散体内不同位置递送一定的能量以选择性降低亚群成员使卵受精的能力而不类似地影响在分散体中其它位置的精细胞；和其后使用该分散体或其衍生物授精雌性哺乳动物。

本发明还涉及体外受精的方法。该方法包括在液体中形成标记的精细胞的分散体，所述液体包含诱导精子不运动性的化学剂或具有诱导精子不运动性的温度，其中与精细胞结合的标记的存在、缺少或数量指示分散体中精细胞亚群的遗传、蛋白质组学、结构或功能的特征。该方法还包括光学检测分散体以鉴定作为亚群成员的个体精细胞；确定分散体中亚群成员的位置、向分散体内不同位置递送能量剂量以选择性降低亚群成员使卵受精的能力而类似地影响在分散体中其它位置的精细胞；和其后使用所述分散体或其衍生物使卵体外受精。可以在其后将受精卵导入雌性哺乳动物的子宫。

本发明还涉及形成冷冻的精子分散体的方法。该方法包括在液体中形成标记的精细胞分散体，所述液体包含诱导精子不运动性的化学剂或具有诱导精子不运动性的温度，其中与精细胞结合的标记的存在、缺少或数量指示分散体中精细胞亚群的遗传、蛋白质组学、结构或功能的特征。该方法还包括光学检测分散体以鉴定作为亚群成员的个体精细胞；确定分散体中亚群成员的位置；向分散体内不同位置递送能量剂量以选择性降低亚群成员使卵受精的能力而不类似地影响在分散体中其它位置的精细胞；和其后冷冻保藏该分散体。

本发明的其它方面和特征部分是显而易见的，部分将于下文说明。

发明详述