[发明专利]转基因大豆A5547-127及其衍生品种的LAMP检测引物组、检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.转基因大豆A5547-127及其衍生品种的LAMP检测引物组，包括外引物1和外引物2、内引物1和内引物2，其核苷酸序列分别如下所示：

外引物1：CCTGTAGCAATGGCAACA（SEQ ID No：1）；

外引物2：CGTGTAGATAACTACGATACGG（SEQ ID No：2）；

内引物1：TTATCCGCCTCCATCCAGTCTACTGGCGAACTACTTACTCTA（SEQ ID No：3）；

内引物2：CTTCCGGCTGGCTGGTTTAGTGCTGCAATGATACCG（SEQ ID No：4）。

2.转基因大豆A5547-127及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，包括如下成分：

（1）引物液：含有权利要求1所述的引物组，浓度分别为4～6μM外引物1、4～6μM外引物2，32～48μM内引物1、32～48μM内引物2；

（2）反应液：含有10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4水溶液，三者的体积比是7～9：4～6：2；

（3）DNA聚合酶：浓度为7～9U/μl；

（4）对照：阳性对照为转基因大豆A5547-127的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA，阴性对照为不含目的基因的反应混合液。

3.根据权利要求2所述的转基因大豆A5547-127及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述引物液中含有5μM外引物1、5μM外引物2，40μM内引物1、40μM内引物2。

4.根据权利要求2所述的转基因大豆A5547-127及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，浓度为8U/μl。

5.根据权利要求2所述的转基因大豆A5547-127及其衍生品种的LAMP检测试剂盒，其特征在于：所述反应液中，10mM dNTP：10×ThermoPol反应缓冲液：150mM MgSO4＝8：5：2体积比。

6.利用权利要求2～5任一项所述的试剂盒检测转基因大豆A5547-127及其衍生品种的方法，包括如下步骤：

（1）待检样品DNA的提取：采用CTAB法提取纯化样品DNA；

（2）恒温基因扩增反应：在200ul PCR管配制反应体系：引物液1μl，反应液 12.5μl，DNA聚合酶1μl，待检DNA 2～5μl，用灭菌去离子水补齐到25μl；设置阳性对照反应时，用转基因大豆A5547-127的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA替代待检DNA，设置阴性对照反应时，用不含目的基因的反应混合液替代待检DNA；将配制好的PCR管混匀后离心，并于63～65℃反应60～90min，并在80℃持续2min；

（3）结果判断：通过观察反应管内沉淀的浊度变化来判断扩增结果。

7.根据权利要求2～5任一项所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：还含有显色剂，所述显色剂为荧光染料SYBRGreen I。

8.利用权利要求7所述的试剂盒检测转基因大豆A5547-127及其衍生品种的方法，包括如下步骤：

（1）待检样品DNA的提取：采用CTAB法提取纯化样品DNA；

（2）恒温基因扩增反应：在200ul PCR管配制反应体系：引物液1μl，反应液 12.5μl，DNA聚合酶1μl，待检DNA 2～5μl，用灭菌去离子水补齐到25μl；设置阳性对照反应时，用转基因大豆A5547-127的DNA或含目的基因的大肠杆菌质粒DNA替代待检DNA，设置阴性对照反应时，用不含目的基因的反应混合液替代待检DNA；将配制好的PCR管混匀后离心，并于63～65℃反应60～90min，并在80℃持续2min；

（3）结果判断：在上述反应管中加入1～2μl显色剂，混匀，根据显色结果来判断扩增结果。