[发明专利]一种结核分枝杆菌重组蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种结核分枝杆菌重组蛋白质及其制备方法和应用。

背景技术

结核病是由结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis，TB )感染所致的人类疾病，是分支杆菌病的主要类型，主要通过呼吸道传播。自1882年德国科学家Rrobert Koch发现TB以来，全球约有两亿人死于TB，且疫情发展日趋严重。据WHO预计，全球现有TB病人2000万，如不控制今后10年还将有9000万人发病。我国现有3.3亿结核菌感染者，肺结核病人600多万，其中有严重传染性的病人150万，每年死于结核病的达25万人。因此，结核病的预防、早期诊断和及时治疗是高度关注的课题。MTB有H37RV与H37Ra两种标准菌株，前者为毒力株而后者为减毒突变株，它们均来源于1934年的人肺H37分离株。与一些临床分离株不同的是，H37RV对药物敏感、利于基因工程操作并在TB动物模型中保留了完整毒力，因而该菌株被广泛应用于TB相关的生物医药研究(MTb H37RV project at Sanger Institute, NCBI)。目前常用的结核病诊断方法有胸部X光透视和主要依靠患者痰液、胸水、支气管肺泡液的显微镜直接涂片检查（AFP）和培养法，以及分子生物学和血清学检查，这些方法多基于高特异性的抗原建立。

发明内容

本发明的目的是提供一种结核分枝杆菌重组蛋白基因SocAB-murB和其编码的一种结核分枝杆菌重组蛋白SocAB-murB。

一种结核分枝杆菌重组蛋白基因SocAB-murB，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

一种结核分枝杆菌重组蛋白SocAB-murB，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

一种结核分枝杆菌蛋白SocAB-murB的表达载体pET-28b-SocAB-murB，其特征在于：在pET-28b中插入了其碱基序列如SEQ ID NO:1所示的基因。

一种表达结核分枝杆菌蛋白的工程菌株，其特征在于：它是转染了权利要求3所述的一种结核分枝杆菌蛋白的表达载体pET-28b-SocAB-murB的大肠杆菌BL21（DE3）。

本发明的另一个目的是一种结核分枝杆菌重组蛋白基因SocAB-murB及其编码的重组蛋白的制备方法的制备方法。

一种结核分枝杆菌重组蛋白基因SocAB-murB的制备方法，它包括以下步骤：

1）提取结核分支杆菌H37RV的基因组；以其为模板，用引物： 

F1：ATCGCATATG TCGATACACCATGGGGACATTTGCCCTCCA 

R1：TCCGTTTCATACCACCACCACCCGTAACGCCCTGA  

F2：ACGGGTGGTGGTGGTATGAAACGGAGCGGTGTCGGTTCGCTCT

R2：ATCGCTCGAG CAACATGCAGCCGATCAGCACGGGTT 

进行第一轮扩增，获得基因片段SocAB 和murB；

2）以第一轮扩增获得的基因片段SocAB 和murB，为模板，用引物：

F1：ATCGCATATG TCGATACACCATGGGGACATTTGCCCTCCA

R2：ATCGCTCGAG CAACATGCAGCCGATCAGCACGGGTT 

进行第二轮扩增，连接基因片段SocAB 和murB，获得目的融合基因SocAB-murB。

一种结核分枝杆菌重组蛋白SocAB-murB的制备方法，它包括以下步骤：

1）将权利要求5所述的一种结核分枝杆菌重组蛋白基因SocAB-murB的制备方法制得的融合基因SocAB-murB，插入表达载体pET-28b中，获得质粒pET-28b-SocAB-murB。

2）将质粒pET-28b-SocAB-murB，转染至大肠杆菌BL21（DE3）中，诱导表达、纯化。

本发明的又一个目的是，所述的结核分枝杆菌重组蛋白SocAB-murB在制备结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒中作为检测抗原的应用。