[发明专利]一种灌流式细胞培养的培养基更换方法有效
| 申请号： | 201210131028.X | 申请日： | 2012-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN102690781A | 公开（公告）日： | 2012-09-26 |
| 发明（设计）人： | 董佳里;钟邵东;曹路君;吴浪波;吴城;齐欣;高燕;王金蓉;周丽微;鲁艳;彭红卫;赵斌;徐小萍 | 申请（专利权）人： | 苏州金盟生物技术有限公司;天津博发生物技术有限公司;成都金凯生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/073;C12N5/09;C12N5/10;C12M3/02 |
| 代理公司： | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峡;全学荣 |
| 地址： | 215425 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 灌流 细胞培养 培养基 更换 方法 | ||
1.一种灌流式细胞培养的培养基更换方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)降温：降低细胞培养罐内培养基的温度至4～15℃；
(2)通氧：通入氧气至培养基的溶氧量为150～250％(mg/L)；
(3)更换培养基：停止搅拌，沉降细胞，沉降时间为0～48h，抽出上清液，加入新鲜培养基。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述温度为8～12℃。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述溶氧量为250％(mg/L)。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述沉降时间为15-36h。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述沉降时间为20-36h。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细胞为哺乳动物细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢细胞、小鼠骨髓瘤细胞、人胚胎肾细胞、骨髓瘤细胞或者HEK293细胞、BHK细胞。
8.一种用于权利要求1～7任意一项所述方法的细胞培养罐，其特征在于：所述搅拌式细胞培养罐包括罐体(1)，罐体(1)上设置导流管(3)，导流管(2)上设置开关(7)，罐体(1)内部设置搅拌器(2)，罐体(1)外部设置夹套(4)，夹套(4)通过循环管(5)与温度调节器(6)连接。
9.根据权利要求8所述的细胞培养罐，其特征在于：所述搅拌器(3)为桨叶式搅拌器。
10.一种灌流式细胞培养方法，其特征在于，它包括如下步骤：
①取细胞，经过复苏、传代后，接种至搅拌式细胞培养罐中搅拌培养，培养温度30℃-37℃；
②结束培养，按照权利要求1～7任意一项所述的方法，更换培养基；
③升高培养基温度至30～37℃，继续培养。
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