[发明专利]基于磁珠法从植物叶片中提取基因组DNA的试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.基于磁珠法从植物叶片中提取基因组DNA的试剂盒，其包括：预处理溶液，快速裂解液，DNA结合液、磁珠悬浮液和洗脱液，

预处理溶液：0.05M～0.2M Tris-Hcl、0.01～0.05M EDTA(乙二胺四乙酸)、1％～3％巯基乙醇、0.5％～2％PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，

快速裂解液：50～100mmol/L KAC(醋酸钾)，PH＝5.2、10～50mmol/LEDTA(乙二胺四乙酸)、4～6M GHCL(盐酸胍)、5～25mM sodium citrate(柠檬酸钠)、1％～5％Tween 20(聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯)，

DNA结合液：5％～10％PEG8000(聚乙二醇8000)、1.5-4M GITC(异硫氰酸胍)，0.5-1M NaCl，

磁珠悬浮液：磁珠溶于超纯水中，其中磁珠的浓度为50-100mg/mL，

洗脱液：1～10mM Tris-HCl、1-2mM EDTA(乙二胺四乙酸)，pH＝8.0。

2.根据权利要求1所述的基于磁珠法从植物叶片中提取基因组DNA的试剂盒，其中，磁珠的颗粒直径为100-200nm，磁珠表面包被硅羟基。

3.权利要求1或2所述的基于磁珠法从植物叶片中提取基因组DNA的试剂盒的提取方法，其包括：

步骤一、取植物叶片放于研钵内研磨充分，研磨时间为1-2min；

步骤二、若所取植物叶片为多糖、多酚、单宁、脂质含量丰富类的植物叶片，加入500μL预处理液，若所取植物为水稻，小麦或者玉米类简单植物叶片，则直接进入步骤三；

步骤三、加入500μL快速裂解液；

步骤四、在8,000-12,000rpm下离心1-3min；

步骤五、小心吸取400μL上清至一新的2mL离心管中，避免吸起沉淀，加入混合液400-1000μL DNA结合液和10-50μL磁珠悬浮液，充分涡旋混匀；

步骤六、在18-25℃下静置5-10min后，将离心管置于磁力架上，静置1-3min；

步骤七、吸去上清，加入体积比为70％的乙醇，将离心管从磁力架上取下，充分涡旋混匀后静置1-3min，再将离心管置于磁力架上；

步骤八、将离心管置于磁力架上风干5-15min；

步骤九、加入100-150μL预热65℃的DNA结合液，将离心管从磁力架上取下，充分涡旋混匀，并在55-80℃水中水浴2-8min；

步骤十、将离心管置于磁力架上，静置1-2min；

步骤十一、小心将上清吸出，备用。

4.根据权利要求3所述的基于磁珠法从植物叶片中提取基因组DNA的提取方法，其中：步骤一中，

若所取植物叶片为新鲜植物叶，则取量不超过100mg，

若所取植物叶片为干燥组织，则取量不超过50mg。

5.根据权利要求4所述的基于磁珠法从植物叶片中提取基因组DNA的提取方法，其中，步骤一中，在研钵内加入液氮后再进行研磨。

6.根据权利要求3或4或5所述的基于磁珠法从植物叶片中提取基因组DNA的提取方法，其中，步骤七与步骤八之间还包括一步骤，吸去上清，加入体积比为70％的乙醇，将离心管从磁力架上取下，充分涡旋混匀后静置1-3min，再将离心管置于磁力架上。