[发明专利]一种口蹄疫疫苗的免疫佐剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗佐剂及其应用，特别涉及一种用于制备口蹄疫疫苗的免疫佐剂及其应用。属于生物疫苗领域。

背景技术

口蹄疫作为重大动物疫病严重威胁畜牧业的健康可持续发展，同时也影响动物食品安全以及外贸出口。一旦发病损失重大，影响恶劣。灭活疫苗作为主要防控物质在控制FMD疫情中发挥十分重要的作用，但由于生产此类疫苗需要建设防止病原体逃逸的高级别生物安全生产车间，区分疫苗免疫和自然感染动物。更为严重的是病毒灭活不完全有引起疫苗毒株流行的危险。为此，1991年后欧盟成员国禁止使用灭活疫苗进行疫情防控，美国也禁止在其本国生产和使用灭活疫苗。2001年英国口蹄疫大流行造成的经济损失和影响引起了全世界对口蹄疫防控策略的新讨论。研发安全高效的新型FMD疫苗成为热点问题，而免疫效力低下及免疫持续期短仍然是制约新型疫苗发展的技术瓶颈。因此，如何提升新型疫苗的免疫效力也是当前要解决的主要问题。目前包括水溶性佐剂(氢氧化铝)和油佐剂(ISA206)在内的多种佐剂被用于改善疫苗的免疫效果，但是用于多表位小分子疫苗的效果并不是十分理想。

目前对于表位疫苗等小分子疫苗采用增加抗原表位，T细胞表位和引入蛋白载体等多种措施提高疫苗的免疫原性，增强免疫应答能力、提升外周血循环抗体的水平和持续时间，虽然在某种程度上明显提高了抗原的免疫原性，但还是达不到期望的效果。最近研究结果显示，在FMDV进化中高度保守的FMD病毒非结构蛋白3D不仅能与所有血清型的FMDV感染血清发生免疫反应，而且富集大量能被不同猪牛MHC分子等位基因识别的T细胞表位。还发现重组3D蛋白能够诱导细胞免疫应答，提供部分保护性免疫应答反应，即免疫猪经强毒攻击后免疫动物的症状明显减轻，发病时间延迟，但免疫动物血清中检测不到FMDV中和性抗体。

本发明研究结果显示，3D蛋白片段与重组表位蛋白联合免疫动物不仅能够改善FMDV特异性抗体滴度，而且能够诱发细胞免疫应答反应。值得一提的是，经本发明表达的3D蛋白N-端蛋白片段不仅发挥了免疫增强作用，而且不与FMDV感染血清发生免疫反应，是一种十分理想的免疫佐剂，添加疫苗后不仅能够增强免疫反应，而且有利于区分感染和免疫动物，是一种很好的免疫刺激剂和疫苗分子标记。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种可用于制备口蹄疫疫苗，增强免疫反应的免疫佐剂；

本发明的目的之二在于提供所述的免疫佐剂在制备口蹄疫疫苗中的应用；

本发明的目的之三在于提供一种含有本发明所述的免疫佐剂的疫苗。

本发明的目的是通过以下技术方案达到的：

本发明的一种口蹄疫疫苗免疫佐剂，其特征在于所述的免疫佐剂具有以下(a)或(b)所示的氨基酸序列：

(a)SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列；或

(b)将SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列通过一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或插入而获得的仍具有口蹄疫病毒非结构蛋白3D功能的蛋白衍生物。

在本发明的一个具体实施例中，所述的免疫佐剂的氨基酸序列如SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16所示。

编码所述的免疫佐剂的核苷酸序列，其特征在于具有以下(a)、(b)或(c)所示的核苷酸序列：

(a)SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列；或

(b)编码SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的核苷酸序列；或

(c)编码具有口蹄疫病毒非结构蛋白3D功能的蛋白衍生物的核苷酸序列，该蛋白衍生物通过将SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列的一个或多个氨基酸残基替换、缺失或插入而获得。

在本发明的一个具体实施例中，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15所示。

进一步的，本发明还提供了一种重组表达载体，其特征在于含有以上所述的核苷酸序列。

更进一步的，本发明还提供了一种宿主菌，其特征在于含有以上所述的重组表达载体。