[发明专利]一种微生物低温保存保护剂和微生物低温保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体地，涉及一种微生物低温保存保护剂和低温保存方法。

背景技术

微生物菌种是一项重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。菌种保藏就是利用一切方法使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。不同菌种或不同要求，适用不同的保藏方法，一般细菌培养物的保藏方法：斜面保藏、液体石蜡保藏、冷冻干燥保藏、液氮超低温保藏法、低温冷冻保藏法。

斜面保藏法，保藏期短；液体石蜡保藏法，必须直立存放，占空间大，不便携带；冻干保藏、液氮超低温保藏法，技术复杂，技术含量高，设备投入高，运行成本高，适合专业保藏机构，不适合生产企业。

低温保藏法是将菌种放置在低温冰箱中以减缓细胞的生理活动而进行的一种保藏方法。目前采用的保藏方法有两种：一是4℃冰箱直接保存(短期)；二是，菌液中加入一定比例的甘油混合后-80℃保存(中长期)。

低温保存，无论是4℃还是-20℃、-80℃，加入一定比例的保护剂，可有效保护微生物活性，提高菌体存活率。而由于各种微生物种类及结构不同，其在低温保存中的最佳保护剂配方也不同。目前，现有的微生物低温保存保护剂为甘油、甘露醇和脱脂奶粉中的至少一种。

但是，实验结果证明，在现有的微生物低温保存保护剂存在下，微生物经过低温保存后的存活率和菌体活性仍然不高。

发明内容

本发明的目的是克服在现有的微生物低温保存保护剂存在下，微生物经过低温保存后的存活率和菌体活性仍然不高的缺陷，提供一种微生物低温保存保护剂和一种微生物低温保存保护方法，以使微生物经过低温保存后的存活率和菌体活性得到提高。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供一种微生物低温保存保护剂，该微生物低温保存保护剂含有低聚糖、甘油、甘露醇、脱脂奶粉和琼脂糖。

另一方面，本发明还提供了一种微生物低温保存方法，该微生物低温保存方法包括：将如上所述的微生物低温保存保护剂与水混合后再与待保存的微生物混合，然后将混合后的物料置于保存温度下；或者将待保存的微生物与含有水的微生物低温保存保护剂混合，然后将混合后的物料置于保存温度下。

通过上述技术方案，微生物经过低温保存后的存活率和菌体活性得到显著提高。具体地，使用本发明提供的微生物低温保存保护剂，可以使得大肠埃希菌(Escherichia coli)在零下20℃的温度下保存半年后的存活率仍可达到95％，而以使用终浓度为15重量％的甘油作为保护剂，大肠埃希菌在零下20℃的温度下保存半年后的存活率仅仅为85％。此外，使用本发明提供的微生物低温保存保护剂，可以使得黄色短杆菌在4℃的温度下保存7天后的种子罐周期仅为15h，而以使用终浓度为15重量％的甘油作为保护剂，黄色短杆菌在4℃的温度下保存7天后的种子罐周期长达18h。

本发明中，术语“种子罐周期”的定义为将10⁹个活菌体经历保藏后全部接种于LB培养基中培养到10¹²个活菌体量所需要的培养时间。经历保藏后的菌体活性越高，种子罐周期越短。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

根据本发明提供的微生物低温保存保护剂，该微生物低温保存保护剂含有低聚糖、甘油、甘露醇、脱脂奶粉和琼脂糖。

其中，该微生物低温保存保护剂可以为固体状的组合物，也可以进一步加水混合为液体状的组合物。典型地，该微生物低温保存保护剂的储存状态为固体状的组合物，使用状态为液体状的组合物。

根据本发明提供的微生物低温保存保护剂，其中，低聚糖、甘油、甘露醇、脱脂奶粉和琼脂糖的含量可以在较大范围内变动，例如，相对于100重量份的低聚糖，甘油的含量可以为20-70重量份，甘露醇的含量可以为20-70重量份，脱脂奶粉的含量可以为100-200重量份，琼脂糖的含量可以为0.1-1.0重量份。

优选情况下，相对于100重量份的低聚糖，甘油的含量为40-70重量份，甘露醇的含量为40-60重量份，脱脂奶粉的含量为150-200重量份，琼脂糖的含量为0.4-0.8重量份。

根据本发明提供的微生物低温保存保护剂，其中，为使所述微生物低温保存保护剂方便直接使用，优选情况下，所述微生物低温保存保护剂还含有水。

其中，相对于100重量份的低聚糖，水的含量可以为800-1500重量份，优选为900-1200重量份。