[发明专利]一种快速定量检测多种蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其涉及一种快速定量、联合测定肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/肌钙蛋白I的免疫荧光试纸条组件及其制备方法。

背景技术

冠心病已成为影响人群健康的主要疾病。急性心肌梗死(AMI)则是造成冠心病人死亡的主要原因。如何及时地发现急性心肌梗死病人及其相应的治疗是挽救心肌梗死病人生命的关键所在。传统的诊断主要是根据典型的临床表现，心电图的改变及实验室酶学检查。但相当一部分心肌梗死病人临床表现不明显，早期心电图无明显改变。在这种情况下，心肌损伤特异性标志物的应用对AMI的早期确诊就起到了关键的作用。

理想的心肌标志物应具备以下特点才能满足临床的需求，为临床快速、准确提供诊断依据。1)高特异性，即该种物质仅存于心肌中，它在血中浓度的升高或降低只能提示心肌有改变。2)高灵敏性，即在心肌受到损伤的早期或心肌有微小的损伤就能检测到该种物质的改变。3)在血液中持续的时间长，如果一过性出现或在血液中存在较短的时间，很难抓住合适的时机检测到阳性结果，容易造成漏诊。4)检测方法简便，易操作，结果及早回报，便于临床医生尽早诊断和及时治疗。

心肌损伤时的血中生化标志物检测异常，是急性心肌梗死(AMI)的重要诊断指标之一。随着科学研究的进展，临床实践中已陆续发现多种反映心肌损伤的标志物，包括反映心肌缺血损伤的标志物：如缺血修饰蛋白，髓过氧化物酶，CD40配体等；心肌缺血坏死的标志物：如肌红蛋白，脂肪酸结合蛋白；心肌组织损伤的确定性标志物：如肌钙蛋白等。现在心肌损伤的血液生化标志物已从最早的以酶活性为主的检测发展到目前以蛋白浓度为主的检测。

肌红蛋白(Mb)存在于心肌和骨骼肌中，虽特异性不高，但是有较高的灵敏性。尽管如此，肌红蛋白在胸痛发作后头几个小时，比CK和CKMB活性敏感性更高，它常于胸痛发作后2～4h开始升高，AMI发作后6～10h，仍可检测到。肌红蛋白对于因胸痛入院需除外AMI的患者是一种非常好的标志物。如果胸痛发作后8h肌红蛋白仍在正常范围，则可排除AMI之诊断。且Mb的半衰期(T_1/2)短，有助于观察病程中有无再梗死的发生以及梗死有无扩展。Mb还是AMI溶栓治疗中评价再灌注与否的较敏感而准确的指标，早期检测Mb可排除AMI。

由于Mb特异性差，所以检测出Mb阳性还需进一步检测CK-MB和肌钙蛋白I。CK-MB是CK的同工酶，仅存在于心肌中。它的检测方法很多，但会受到很多因素影响；CK-MB质量是测定其蛋白浓度，避免了活性测定中的干扰而且具有高度的敏感性(最低检测限≤1ug)和准确性，测定时间短(最短仅需7min)，已被广泛使用。

近年来的临床实践证实，心肌肌钙蛋白I(cTnI)是目前临床上敏感性和特异性最好的心肌损伤标志物，已成为心肌损伤(心肌梗死)最重要的诊断依据。当心肌细胞膜的完整性受破坏，cTnI先从胞浆内释放，因此血清水平很快升高，而结合的cTnI由于相对分子质量大，从心肌细胞结构蛋白缓慢持续的释放，心肌损伤后4～6h释放入血，达到诊断决定值。心肌缺血症状发作后14～36h出现高峰，高峰出现时间与血中CK、CK-MB相似。持续3～7天，部分病例14天时仍可测到。

目前肌红蛋白、CK-MB和cTnI的检测多采用化学发光法，用化学发光物质标记后作为检测抗体，大大提高了测定的精确性和敏感性，但需要昂贵的检测设备，不利于临床推广，尤其是基层医院的应用。目前的床旁检测方法(胶体金试纸法)，虽能满足临床快速和多个心肌标记物联合检测的要求，尤其是符合基层医院需求，但因其只是定性检测，不能满足临床诊断准确定量的要求，无法对AMI的病程起到很好的疗效监测作用。因此，建立一种检测时间尽量缩短，并且检测除了能在实验室进行外，还要求能够进行床旁检测，并能同时定量测定多个心肌标记物的检测方法，从而为临床提供准确的诊断依据，是十分必要的。

发明内容

为解决上述的现有技术的不足，本发明将荧光素发光材料与免疫层析技术相结合，提供了一种试纸条组件以检测人体内多种蛋白水平，所述的多种蛋白为肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/肌钙蛋白I，本发明只需要配套常规的专用荧光检测仪即可同时检测肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/肌钙蛋白I，其制作成本低廉，操作简单、快速、灵敏，且特异性好，对于心脑血管事件发生的预防有极为重要的意义。

具体的，为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案：