[发明专利]焦磷酸测序法检测他克莫司个体化用药基因多态性的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种焦磷酸测序法检测他克莫司个体化用药基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下引物：

（1）扩增引物：

     上游引物：5′-ACG TAT GTA CCA CCC AGC TT-3′；

                    5′- GCT GAG AAC ATT GCC TAT GGA -3′；

     下游引物：5′-GCC AGA CTT TGA TCA TTA TGT TA-3′；

                    5′- CAT GCT CCC AGG CTG TTT AT -3′；

     其中，下游引物的5′进行生物素标记；

（2）测序引物：5′- AGA GCT CTT TTG TCT TTC A -3′；

                      5′- GGT GTC ACA GGA AGA GAT -3′。

2.一种应用权利要求1所述的试剂盒检测他克莫司个体化用药基因多态性的方法，包括如下步骤：

（1）DNA提取；

（2）聚合酶链反应：

配制50μl PCR扩增体系，包含：10×PCR buffer 10.0μl， dNTP 3.0μl，上游引物 1.0μl， 下游引物1.0μl， rTaq1.0μl，水30.0μl，模板4.0μl；循环程序为：95 ^oC 5min预变性；依次在95^oC 30S，52^oC 30S，67^oC 30S，进行40个循环； 72^oC 保持5min，最终保持在4 ^oC，得扩增产物；

（3）焦磷酸测序单链样本纯化；

（4）焦磷酸测序及结果分析。